[發明專利]一種具有舒張血管作用的環肽類化合物及制備方法和用途

有效

• 申請號: 200810093641.0
• 申請日: 2008-04-18
• 公開（公告）號: CN101289494A
• 公開（公告）日: 2008-10-22
• 發明（設計）人: 馮前進;張立偉;郭光明;周曉慶
• 申請（專利權）人: 北京博恩特藥業有限公司
• 主分類號: C07K2/00
• 分類號: C07K2/00;C07K1/16;C07K1/14;A61K38/12;A61P9/08
• 代理公司: 北京太兆天元知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 張韜

技術領域

本發明涉及一種環肽類化合物及其制備方法和用途，特別涉及一種從天然藥用植物枸杞子中提取的具有舒張血管作用的枸杞子環肽類化合物及其制備方法和用途。

背景技術

枸杞子是我國的傳統中藥材，是茄科植物寧夏枸杞Lycium?barbarum.L的干燥成熟果實，其性味甘、平，功能滋補肝腎，益精明目，主治虛勞精虧，腰膝酸痛；藥理研究表明，枸杞子具有增強免疫力、抗腫瘤、防衰老、增加造血功能、抗脂肪肝等方面的藥理作用；近年來對枸杞植物的化學成分研究發現含有多種氨基酸、黃酮、枸杞多糖、超氧化物歧化酶、生物堿、甾醇等活性成分，環肽類化合物在枸杞植物的干燥根皮中也有所發現，但枸杞子中迄今未見環肽類化合物的報道，也未見枸杞子具有舒張血管作用的報道。

發明內容

本發明的目的在于公布從天然中藥枸杞子中提取的一種具有舒張血管作用的環肽類化合物，本發明的另一個目的在于公布該類化合物的制備方法和用途。

本發明目的是通過如下技術方案實現：

本發明環肽類化合物的制備方法包括如下步驟：

a將枸杞子用85％～100％的乙醇回流提取2-4次，合并浸取液，靜置，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇，制得相對密度為1.1～1.4的乙醇提取物浸膏；

b乙醇提取物浸膏加水制成相對密度為1.0～1.2的混懸液，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯部分，減壓回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯提取物；

c乙酸乙酯提取物用苯乙烯類DIAION?HP20大孔吸附樹脂柱層析分離1-3次，用0％、20％、40％、60％、80％、100％的甲醇-水為洗脫劑進行梯度洗脫，按梯度收集洗脫液；各梯度洗脫液分別使用雙向展開方式進行薄層層析檢測：分別取10mm×10mm的硅膠板，按照雙向薄層層析點樣方法點樣，用氯仿∶甲醇＝5-15∶1作為展開劑進行第一向展開；展開完畢并揮掉溶劑后，將硅膠板懸于底部加有2mL?6mol/L濃鹽酸的密閉玻璃缸中，置于100-120℃的烘箱中加熱水解1-3h，冷卻后取出硅膠板，在通風櫥中揮掉鹽酸；將硅膠板旋轉90度，以6-10∶1-3∶1-3的氯仿-甲醇-冰醋酸作為展開劑進行第二向展開；展開完畢并揮掉溶劑后，噴灑0.2％茚三酮--丙酮試劑，置于100--110℃的烘箱中加熱2-10分鐘，觀察顯色斑點；收集斑點顏色相同的流分，即得含有環肽類化合物的流分；用硅膠反復柱層析1-3次，得環肽類化合物。

本發明環肽類化合物的制備方法優選為如下步驟：

a將枸杞子用90％的乙醇回流提取3次，合并浸取液，靜置，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇，制得相對密度為1.2～1.3的乙醇提取物浸膏；

b乙醇提取物浸膏加水制成相對密度為1.0～1.1混懸液，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯部分，減壓回收乙酸乙酯得乙酸乙酯提取物；

c乙酸乙酯提取物用苯乙烯類DIAION?HP20大孔吸附樹脂柱層析分離1-3次，用0％、20％、40％、60％、80％、100％的甲醇-水為洗脫劑進行梯度洗脫，按梯度收集洗脫液；各梯度洗脫液分別使用雙向展開方式進行薄層層析檢測：分別取10mm×10mm的硅膠板，按照雙向薄層層析點樣方法點樣，用氯仿∶甲醇＝10∶1作為展開劑進行第一向展開；展開完畢并揮掉溶劑后，將硅膠板懸于底部加有2mL?6mol/L濃鹽酸的密閉玻璃缸中，置于110℃烘箱中加熱水解1.5h，冷卻后取出硅膠板，在通風櫥中揮掉鹽酸；將硅膠板旋轉90度，以8∶2∶2的氯仿-甲醇-冰醋酸作為展開劑進行第二向展開；展開完畢并揮掉溶劑后，噴灑0.2％茚三酮--丙酮試劑，置于105℃的烘箱中加熱5分鐘，觀察顯色斑點；收集斑點顏色相同的流分，即得含有環肽類化合物的流分；用硅膠反復柱層析3次，得環肽類化合物。

附圖說明

圖1：單相薄層層析圖；

圖2：兩相薄層層析圖；

圖3：空白組血管環張力記錄圖；

圖4：環肽組血管環張力記錄圖。

本發明用乙醇回流提取枸杞子，提取物依次用大孔吸附樹脂、硅膠分離純化，提取得到一種環肽類化合物，體外離體試驗表明該環肽類化合物具有較強的舒張血管作用；通過薄層原位化學反應法進行定性篩選發現枸杞子對該反應呈陽性，且重現性好。

下面實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發明。

實驗例1本發明環肽類化合物舒張血管的離體實驗：離體血管環的制備和張力測定

實驗儀器：BIOPAC?Systems?MP-100；

實驗樣品：環肽樣品加3ml水溶解；