[發明專利]尿道炎衣原體細胞培養維持液

無效

• 申請號: 200810093415.2
• 申請日: 2008-04-21
• 公開（公告）號: CN101698872A
• 公開（公告）日: 2010-04-28
• 發明（設計）人: 曲奕
• 申請（專利權）人: 曲奕
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域????本發明涉及一種尿道炎衣原體細胞培養維持液；特別是一種尿道炎衣原體細胞培養維持液的配方及其制備方法。其主要成分是氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀、硫酸鎂、葡萄糖、氯化鈣、水解乳白蛋白、小牛血清、1％谷氨酰胺、2-巰基乙醇、青霉素、鏈霉素、慶大霉素、EDTA、0.5％酚紅。沙眼衣原體生殖道感染是最常見性傳播性疾病之一。沙眼衣原體還被認為是盆腔炎及其后遺癥——輸卵管不孕和異位妊娠的重要病因。孕婦患沙眼衣原體宮頸炎，胎兒經產道分娩時可感染沙眼衣原體結膜炎和肺炎。衣原體細胞培養法是檢查衣原體最敏感、最可靠的方法。該細胞培養維持液能夠培養檢測生殖道衣原體，具有指導臨床診斷和治療的作用，為防止濫用抗菌藥物也具有重要意義。常用McCoy細胞或Hela229單層細胞培養，通過觀察細胞病變(腫大，變性，脫落)及細胞內特征性包涵體可確定診斷。其敏感性約為80％～90％，特異性為100％。并可用于藥物敏感試驗，還可檢測治療后病人是否存在活的衣原體，以判定療效。該方法操作繁鎖、費時，設備昂貴，技術性強，臨床不易推廣。沙眼衣原體需要在實驗室做細胞培養進行分離，因此，多年來細胞培養一直做為衣原體檢測的“金標準”，細胞培養對設備、技術、標本采集和運送等的要求都非常高，從尿道、宮頸采集的柱狀細胞，不宜混有多核細胞及粘液膿性分泌物，不宜含有過多的雜質。對采集拭子也有要求：應是棉拭子而不應是木制拭子，因為木制拭了可能抑制衣原體生長。宮頸內標本有細胞刷可采集到更從的細胞以提高培養的敏感性。標本必須放置在特制的轉運培基中，冷凍，24小時內包埋到細胞培養盤中。培養時McCoy細胞的狀態也會影響最終結果。當McCoy細胞過度生長、變形、破裂甚至完全失去細胞形態時，則無從觀察細胞中的包涵體。

細胞培養無論在花費上、設備、技術方面都要求非常高，對于細胞培養來講，花費和時間是影響衣原體細胞培養作為診斷方法使用和推廣的最大障礙。很多研究人員在細胞培養方法的改進上進了多方面探索。

背景技術????生殖道感染發病率很高，流行范圍很廣，其病原菌50％為沙眼衣原體；30％為尿素分解衣原體；20％由其他致病菌感染引起。所有沙眼衣原體均可在細胞培養中生長，現多采用McCoy或HeLa229細胞株，在接種衣原體前，以X線照射細胞，或于細胞培養中加入代謝抑制如細胞松弛素B、DEAE葡聚糖呈放線菌酮，其目的在于細胞生長代謝緩慢，以利于衣原體的寄生性生長。細胞培養無論在花費上、設備、技術方面都要求非常高，對于細胞培養來講，花費和時間是影響衣原體細胞培養作為診斷方法使用和推廣的最大障礙。目前，細胞培養仍是診斷衣原全感染最為可靠的實驗方法，習慣上把細胞培養作為“金標準”。用細胞培養的方法來確定衣原體的感染涉及4個方面的影響因素：①盡可能采集含有較多上皮細胞的樣本；②在轉運培基中添加抗生素以防止標本中細菌的過度生長；③使用抗代謝藥物抑制組織細胞的復制；④使用碘、Giemsa、免疫熒光染色來鑒定感染細胞中的衣原體。本發明的目的在于提供一種尿道炎衣原體細胞培養維持液，與其它類試劑相比具備下列特點：尿道炎衣原體細胞培養維持液，營養豐富、配制簡單、選擇性強和變色靈敏，與傳統試劑比較，檢出率高，污染小，臨床應用效果滿意.檢測方法簡單、時間短、準確性強。可防止標本中細菌的過度生長，培養組織細胞的復制得以抑制。

發明內容????本發明的要點在于選擇合適的組分，并進行合理混配，經加溫、溶解、混合、冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種尿道炎衣原體細胞培養維持液。

本發明選擇的培養基配方如下(克、ml/每升蒸餾水)氯化鈉70.0-90.0；磷酸氫二鈉0.5-0.7；磷酸二氫鉀0.5-0.7；氯化鉀3.0-5.0；硫酸鎂1.5-3.0葡萄糖8.0-12.0；氯化鈣1.0-2.0；水解乳白蛋白2.0-3.0；小牛血清10.0-12.0ml；1％谷氨酰胺1.0-1.2ml；2-巰基乙醇0.5-0.6；青霉素、鏈霉素、慶大霉素(10000U/ml)10.0-15.0ml；EDTA?0.1-0.3；0.5％酚紅3.0-5.0ml；雙蒸水加至1000ml；調pH至7.2-7.4。