[發(fā)明專利]衣原體中和營(yíng)養(yǎng)消化液

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810093409.7
• 申請(qǐng)日: 2008-04-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101565728A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-10-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曲奕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 曲奕
• 主分類號(hào): C12Q1/04
• 分類號(hào): C12Q1/04
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種衣原體中和營(yíng)養(yǎng)消化液；特別是在臨床大量使用抗生素后的尿道炎患者，需要衣原體細(xì)胞培養(yǎng)檢查時(shí)，使用細(xì)胞培養(yǎng)基的配方及其制備方法。其配方主要成分是：土溫-80、卵磷酯、氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀、硫酸鎂、葡萄糖、氯化鈣、水解乳白蛋白、小牛血清、1％谷氨酰胺、2-巰基乙醇、青霉素、鏈霉素、慶大霉素、EDTA、0.5％酚紅。沙眼衣原體生殖道感染是最常見(jiàn)性傳播性疾病之一。沙眼衣原體還被認(rèn)為是盆腔炎及其后遺癥——輸卵管不孕和異位妊娠的重要病因。孕婦患沙眼衣原體宮頸炎，胎兒經(jīng)產(chǎn)道分娩時(shí)可感染沙眼衣原體結(jié)膜炎和肺炎。衣原體細(xì)胞培養(yǎng)法是檢查衣原體最敏感、最可靠的方法。尤其對(duì)慢性患者及女性患者，需經(jīng)培養(yǎng)后才能做出正確診斷；對(duì)已治療的患者需經(jīng)培養(yǎng)才能證實(shí)是否痊愈。該培養(yǎng)基能夠檢測(cè)大量臨床使用抗生素后的生殖道衣原體陽(yáng)性結(jié)果，具有指導(dǎo)臨床診斷和治療的作用，為防止濫用抗菌藥物也具有重要意義。常用McCoy細(xì)胞或Hela229單層細(xì)胞培養(yǎng)，通過(guò)觀察細(xì)胞病變(腫大，變性，脫落)及細(xì)胞內(nèi)特征性包涵體可確定診斷。其敏感性約為80％～90％，特異性為100％。并可用于藥物敏感試驗(yàn)，還可檢測(cè)治療后病人是否存在活的衣原體，以判定療效。該方法操作繁鎖、費(fèi)時(shí)，設(shè)備昂貴，技術(shù)性強(qiáng)，臨床不易推廣。沙眼衣原體需要在實(shí)驗(yàn)室做細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行分離，因此，多年來(lái)細(xì)胞培養(yǎng)一直做為衣原體檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)設(shè)備、技術(shù)、標(biāo)本采集和運(yùn)送等的要求都非常高，從尿道、宮頸采集的柱狀細(xì)胞，不宜混有多核細(xì)胞及粘液膿性分泌物，不宜含有過(guò)多的雜質(zhì)。對(duì)采集拭子也有要求：應(yīng)是棉拭子而不應(yīng)是木制拭子，因?yàn)槟局剖昧丝赡芤种埔略w生長(zhǎng)。宮頸內(nèi)標(biāo)本有細(xì)胞刷可采集到更從的細(xì)胞以提高培養(yǎng)的敏感性。標(biāo)本必須放置在特制的轉(zhuǎn)運(yùn)培基中，冷凍，24小時(shí)內(nèi)包埋到細(xì)胞培養(yǎng)盤(pán)中。培養(yǎng)時(shí)McCoy細(xì)胞的狀態(tài)也會(huì)影響最終結(jié)果。當(dāng)McCoy細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)、變形、破裂甚至完全失去細(xì)胞形態(tài)時(shí)，則無(wú)從觀察細(xì)胞中的包涵體。細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)論在花費(fèi)上、設(shè)備、技術(shù)方面都要求非常高，對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)講，花費(fèi)和時(shí)間是影響衣原體細(xì)胞培養(yǎng)作為診斷方法使用和推廣的最大障礙。很多研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)方法的改進(jìn)上進(jìn)了多方面探索。

背景技術(shù)

由沙眼衣原體引起的泌尿生殖系統(tǒng)化疾病是近年來(lái)越來(lái)越引起臨床重視的病原體之一。尤其是大量臨床用抗生素后的沙眼衣原體檢測(cè)十分難檢，由于標(biāo)本中含大量殘余抗生素，在恢復(fù)培養(yǎng)沙眼衣原體時(shí)繼續(xù)受到殘余抗生素的作用。因此，不采用去除殘余的抗生素措施的實(shí)驗(yàn)，應(yīng)認(rèn)為是在設(shè)計(jì)上的嚴(yán)重失誤，依據(jù)這樣的實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)果是不可靠的。細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)論在花費(fèi)上、設(shè)備、技術(shù)方面都要求非常高，對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)講，花費(fèi)和時(shí)間是影響衣原體細(xì)胞培養(yǎng)作為診斷方法使用和推廣的最大障礙。目前，細(xì)胞培養(yǎng)仍是診斷衣原全感染最為可靠的實(shí)驗(yàn)方法，習(xí)慣上把細(xì)胞培養(yǎng)作為“金標(biāo)準(zhǔn)”。用細(xì)胞培養(yǎng)的方法來(lái)確定衣原體的感染涉及5個(gè)方面的影響因素：①盡可能采集含有較多上皮細(xì)胞的樣本；②在轉(zhuǎn)運(yùn)培基中添加抗生素以防止標(biāo)本中細(xì)菌的過(guò)度生長(zhǎng)；③④使用抗代謝藥物抑制組織細(xì)胞的復(fù)制；⑤使用碘、Giemsa、免疫熒光染色來(lái)鑒定感染細(xì)胞中的衣原體。本發(fā)明的目的在于提供一種衣原體中和營(yíng)養(yǎng)消化液，與其它類試劑相比具備下列特點(diǎn)：衣原體中和營(yíng)養(yǎng)消化液營(yíng)養(yǎng)豐富、配制簡(jiǎn)單、選擇性強(qiáng)和變色靈敏，與傳統(tǒng)試劑比較，檢出率高，污染小，臨床應(yīng)用效果滿意.檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、時(shí)間短、準(zhǔn)確性強(qiáng)。可防止標(biāo)本中細(xì)菌的過(guò)度生長(zhǎng)，培養(yǎng)組織細(xì)胞的復(fù)制得以抑制。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的要點(diǎn)在于選擇合適的組分，并進(jìn)行合理混配，經(jīng)加溫、溶解、混合、冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種衣原體中和營(yíng)養(yǎng)消化液。

本發(fā)明選擇的衣原體中和營(yíng)養(yǎng)消化液配方如下(克、ml/每升蒸餾水)：土溫-800.3-0.5；卵磷酯0.5-0.8；氯化鈉70.0-90.0；磷酸氫二鈉0.5-0.7；磷酸二氫鉀0.5-0.7；氯化鉀3.0-5.0；硫酸鎂1.5-3.0葡萄糖8.0-12.0；氯化鈣1.0-2.0；水解乳白蛋白2.0-3.0；小牛血清10.0-12.0ml；1％谷氨酰胺1.0-1.2ml；2-巰基乙醇0.5-0.6；青霉素、鏈霉素、慶大霉素(10000U/ml)10.0-15.0ml；EDTA?0.1-0.3；0.5％酚紅3.0-5.0ml；雙蒸水加至1000ml；調(diào)pH至7.2-7.4。

土溫-80、卵磷酯是中性中和劑，能夠有效的將樣本中的殘余抗生素吸附中和，中和產(chǎn)物對(duì)培養(yǎng)物無(wú)影響。