[發明專利]穩定表達T7 RNA聚合酶的ST細胞系及其構建方法和應用

無效

• 申請號: 200810093214.2
• 申請日: 2008-04-23
• 公開（公告）號: CN101285054A
• 公開（公告）日: 2008-10-15
• 發明（設計）人: 仇華吉;祁巧芬;孫元;李娜
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N9/00;C12N15/52;C12N15/85
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

技術領域

本發明涉及ST細胞系，尤其涉及一株能夠穩定表達T7RNA聚合酶的ST細胞系，本發明還涉及該細胞系的構建方法及其應用，屬于生物技術領域。

背景技術

十余年前，在分子病毒學研究領域興起了一種反向遺傳操作技術，即病毒的感染性全長cDNA克隆技術，解決了RNA病毒基因組難以體外操作這一難題。RNA病毒的反向遺傳系統，是采用病毒的基因組，在培養細胞或易感宿主中重新拯救出活病毒或其衍生病毒。能夠拯救病毒的基因組克隆稱為感染性克隆，一般是在細菌質粒中插入整個病毒基因組cDNA拷貝，使得cDNA本身或從cDNA體外轉錄所得的RNA具有感染性。反向遺傳操作主要有3種方案。一是基于體外轉錄的感染性RNA，二是細胞內轉錄的感染性RNA，三是基于DNA的感染性cDNA克隆。細胞內轉錄主要采用表達RNA聚合酶(如T7RNA聚合酶)的重組病毒(Baron?MD，Barrett?T.Rescue?of?rinderpest?virus?from?cloned?cDNA.J?Virol，1997，71(2)：1265-1271；Evans?S，Cavanagh?D，Britton?P.Utilizing?fowlpox?virusrecombinants?to?generate?defective?RNAs?of?the?coronavirus?infectious?bronchitisvirus.J?Gen?Virol，2000，81(12)：2855-2865.)和穩定細胞系(Radecke?F，SpielhoferP，Schneider?H，et?al.Rescue?of?measles?viruses?from?cloned?DNA.EMBO?J.1995，14(23)：5773-5784；Xiu?MH，Wang?Q，Tang?LH，et?al.Rescue?of?minireplicon?byusing?the?cell?line?stably?expressing?the?T7?RNA?polymerase.Bing?Du?Xue?Bao(病毒學報)，2007，23(4)：326-330；Freiberg?A，Dolores?LK，Enterlein?S，et?al.Establishment?and?characterization?of?plasmid-driven?minigenome?rescue?systems?forNipah?virus：RNA?polymerase?I-and?T7-catalyzed?generation?of?functionalparamyxoviral?RNA.Virology，2008，370(1)：33-44.)。

T7RNA聚合酶是T7噬菌體編碼的一種依賴于DNA的RNA聚合酶，對T7啟動子序列具有高度特異性，是分子克隆和反向遺傳操作常用的一種RNA聚合酶。T7RNA聚合酶基因能夠穩定地整合到哺乳動物細胞的基因組中，并且能夠在多種靶細胞內高水平表達(Elroy-Stein?O，Moss?B.Cytoplasmic?expression?systembased?on?constitutive?synthesis?of?bacteriophage?T7RNA?polymerase?in?mammaliancells.Proc?Natl?Acad?Sci?USA，1990，87：6743-6767.)。由于T7RNA聚合酶在真核細胞中具有一定程度的轉錄活性，一直廣泛應用于病毒拯救中(Kwon?B，AnsariIH，Osorio?FA，et?al.Infectious?clone?derived?viruses?from?virulent?and?vaccinestrains?of?porcine?reproductive?and?respiratory?syndrome?virus?mimic?biologicalproperties?of?their?parental?viruses?in?a?pregnant?sow?model.Vaccine，2006，24(49-50)：7071-80.)。