[發(fā)明專利]通過測定PPARδ激活作用篩選物質(zhì)的方法和藥劑

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810090910.8
• 申請日: 2002-07-17
• 公開（公告）號: CN101259276A
• 公開（公告）日: 2008-09-10
• 發(fā)明（設計）人: 山岡一良;高木健一郎;片岡健一郎;山本真則;近西俊洋
• 申請（專利權(quán)）人: 帝人株式會社
• 主分類號: A61K45/06
• 分類號: A61K45/06;A61K31/5578;A61K31/216;A61P3/10;A61P3/04;G01N33/50;G01N33/15
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 郭文潔;梁謀

本申請是申請日為2002年7月17日，申請?zhí)枮?2814450.3的、發(fā)明名稱和本發(fā)明相同的發(fā)明專利申請的分案申請。

技術領域

本發(fā)明涉及一種通過測定激活過氧化物酶體增殖物激活受體δ(peroxisome?proliferator?activated?receptorδ，PPARδ)的作用來篩選具有產(chǎn)熱促進作用的物質(zhì)的方法，以及含有具有產(chǎn)熱促進作用的化合物的藥劑，該藥劑具有PPARδ激活作用。另外，本發(fā)明涉及一種能專一性地增強線粒體功能中的解偶聯(lián)蛋白(UCP)導致的解偶聯(lián)呼吸或在線粒體內(nèi)膜中質(zhì)子泄漏(以下一般稱之為質(zhì)子泄漏)的藥劑，線粒體是使用脂肪酸和丙酮酸作為底物的能量代謝(呼吸)細胞內(nèi)的細胞器。另外，本發(fā)明涉及抗糖尿病藥劑、抗肥胖藥劑、以及減少內(nèi)臟積累脂肪的藥劑或抑制內(nèi)臟積累脂肪的藥劑。

背景技術

體內(nèi)的能量代謝調(diào)節(jié)系統(tǒng)，包括食物攝取調(diào)節(jié)系統(tǒng)和能量消耗調(diào)節(jié)系統(tǒng)。能量消耗調(diào)節(jié)系統(tǒng)參與兩種類型的能量消耗，即用于基礎代謝以便維持生命的能量消耗，和其他能量消耗。在后一種情況下的主要能量消耗是非戰(zhàn)栗產(chǎn)熱(nonshivering?thermogenesis，nST)，它是產(chǎn)熱的，并且，它的功能意義是在出生之后即刻、在接觸寒冷期間以及在冬眠結(jié)束時保持體溫等，以及通過消耗由于吃得過多而產(chǎn)生的多余能量，從而抑制肥胖和糖脂代謝疾病等。特別是在恒溫的哺乳動物和鳥類中，尤其是小型動物中，nST對于保持體溫來說是重要的。在誘導nST的機制中，線粒體中的質(zhì)子泄漏，即細胞呼吸鏈的電子轉(zhuǎn)運系統(tǒng)和ATP合成的參與是重要的。

在褐色脂肪組織(BAT)中，在線粒體膜中存在一種被稱為解偶聯(lián)蛋白(UCP1)的特殊蛋白，其分子量為32kD，并且包括大約300個氨基酸。該蛋白具有使ATP合成與褐色脂肪細胞(BA)的呼吸鏈的電子轉(zhuǎn)運系統(tǒng)解偶聯(lián)的作用。UCP1包括一種結(jié)構(gòu)域的三次重復的結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)域包括約100個氨基酸，并且每個結(jié)構(gòu)域具有兩個跨膜部位，一共6個部位。所述跨膜區(qū)構(gòu)成了線粒體膜上的通道。

UCP1是轉(zhuǎn)運質(zhì)子的載體。由UCP1和其他成分構(gòu)成的質(zhì)子通道具有按照電化學梯度使質(zhì)子自由穿透，以釋放熱量的功能。這就是nST。就是說，nST通過經(jīng)質(zhì)子通道的質(zhì)子滲透導致所述解偶聯(lián)，并且，所述解偶聯(lián)減弱了ATP合成，激活了線粒體內(nèi)的呼吸，從而保持ATP與ADP的比例恒定。結(jié)果，大量脂肪和糖被氧化以產(chǎn)生熱量。

UCP1的生理學作用是在出生之后即刻、在接觸寒冷期間等情況下保持體溫，并且，用轉(zhuǎn)基因小鼠進行的研究，業(yè)已證實了它參與肥胖的抑制。在各種肥胖模型中，UCP1表達減弱這一事實，表明了UCP1與肥胖發(fā)生、發(fā)展和持續(xù)的相關性。例如，業(yè)已證實，在BAT減少的轉(zhuǎn)基因小鼠中，在沒有過量進食的情況下出現(xiàn)了肥胖(Lowell等，Nature，366，740-742(1993))。另外，在小鼠中觀察到了身體脂肪的減少，和對由于高脂肪食物所導致的飲食誘導的肥胖的抗性，其中通過將UCP1基因插入脂肪專一性基因aP2的啟動子，強制所述小鼠表達大量的UCP?1(Kopecky等，J.Clin?Invest，96，2914-2923(1995))。另外，在UCP1表達被抑制到1/3的小鼠體內(nèi)，觀察到了在暴露于寒冷的環(huán)境時體溫保持功能的減弱、由于身體脂肪的增加而導致的肥胖和胰島素抗性(Lowell?B.B.等，Nature，366，740-742(1993))。另外，UCP1剔除小鼠是不耐寒的(Enerback?S.等，Nature，387，90-94(1997))。如上文所述，通過動物實驗業(yè)已了解到UCP1作為產(chǎn)熱分子在體溫調(diào)節(jié)和能量消耗方面具有重要作用，并且與肥胖密切相關。

UCP1表達的數(shù)量，主要是由核內(nèi)基因轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控的，而UCP1基因表達隨cAMP濃度的提高而加強(齋藤等，最新醫(yī)學，52，1095-1096(1997))。

大約20-40％的細胞內(nèi)能量消耗被認為是通過線粒體內(nèi)膜上的質(zhì)子泄漏而產(chǎn)生的。另外，在具有很少BAT的成年人和其他動物中，大部分nST被認為是在骨骼肌和白色脂肪組織(WAT)中產(chǎn)生的。基于上述事實，一直認為UCP存在于除了BAT以外的組織中。有兩個研究小組在1997年連續(xù)報導了來自除了BAT以外的組織的UCP2的cDNA克隆(Fleury等，Nature?Genet，15，269-272(1997)；Gimeno等，Diabetes??46，900-906(1997))。