[發明專利]淀粉酶變體

在審

• 申請號: 200810088547.6
• 申請日: 1996-02-05
• 公開（公告）號: CN101381712A
• 公開（公告）日: 2009-03-11
• 發明（設計）人: H·比斯加德－佛蘭茨;A·斯文森;T·V·伯切爾特
• 申請（專利權）人: 諾維信公司
• 主分類號: C12N9/28
• 分類號: C12N9/28;C12N15/56;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/21;C11D3/386;D06L1/00;C12S11/00
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所
• 代理人: 封新琴

1.一種親本α-淀粉酶的變體，該親本α-淀粉酶:(i)具有選自分別在SEQ ID?No.1、SEQ?ID?No.2、SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.7中所示氨基酸序列的 氨基酸序列；或(ii)與這些氨基酸序列中的一種或多種顯示出至少80％的同 源性；和/或顯示出與如下抗體的免疫交叉反應性，所述抗體針對具有這些 氨基酸序列之一的α-淀粉酶產生；和/或由如下DNA序列編碼，所述DNA 序列與編碼具有這些氨基酸序列之一的α-淀粉酶之DNA序列與相同的探針 雜交；在這種變體中:

(a)所說的親本α-淀粉酶的至少一個氨基酸殘基已被缺失；和/或

(b)所說的親本α-淀粉酶的至少一個氨基酸殘基已被不同的氨基酸殘基 取代；和/或

(c)相對所說的親本α-淀粉酶而言至少有一個氨基酸殘基已被插入；

所說的變體具有α-淀粉酶活性并且相對于所說的親本α-淀粉酶表現出 至少一種下列性質:增加的熱穩定性；增加的氧化穩定性；和降低的Ca²⁺依賴性；

其條件是所說的變體的氨基酸序列不與分別在SEQ?ID?No.1、SEQ?ID No.2、SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.7中所示的氨基酸序列之任一相同。

2.按照權利要求1的變體，其中所說的親本α-淀粉酶的至少一個可氧化 的氨基酸殘基已被缺失或已被不同的氨基酸殘基取代，后者對氧化不如所 說的可氧化的氨基酸殘基敏感。

3.按照權利要求2的變體，其中所說的可氧化的氨基酸殘基選自由甲硫 氨酸、色氨酸、半胱氨酸和酪氨酸組成的組。

4.按照權利要求2或3的變體，其中所說的可氧化的氨基酸殘基是甲硫 氨酸，該甲硫氨酸是或等同于在SEQ?ID?No.1中所示氨基酸序列的M9、 M10、M105、M202、M208、M261、M309、M382、M430或M440。

5.按照權利要求4的變體，該變體包含甲硫氨酸取代，此甲硫氨酸取代 是或等同于在SEQ?ID?No.1中所示氨基酸序列的下列取代之一:M9L； M10L；M105L；M202L、T、F、I、V；M208L；M261L；M309L；M382L； M430L；M440L。

6.按照權利要求3-5任一之變體，其中所說的甲硫氨酸殘基已被蘇氨酸 取代。

7.根據以上權利要求任一之變體，其中至少一個氨基酸已被缺失，該 氨基酸是或等同于在SEQ?ID?No.1中所示氨基酸序列的F180、R181、G182、 T183、G184或K185。

8.按照權利要求7的變體，其中所說的缺失的氨基酸是或等同于所說的 氨基酸殘基中的任何兩個。

9.按照權利要求8的變體，其中所說的缺失是或等同于R181^*+G182^*或T183^*+G184^*。

10.根據以上權利要求任一之變體，該變體包含氨基酸取代，此取代是 或等同于在SEQ?ID?No.1中所示氨基酸序列中的下列取代之一:K269R； P260E；R124P；M105F、I、L、V；M208F、W、Y；L217I；V206I、L、F。

11.按照以上權利要求任一之變體，該變體包含氨基酸取代，此取代是 或等同于在SEQ?ID?No.1中所示氨基酸序列中的下列取代之一:Y243F、 K108R、K179R、K239R、K242R、K269R、D163N、D188N、D192N、D199N、 D205N、D207N、D209N、E190Q、E194Q、N106D。

12.一種包含編碼按照權利要求1-11任一之α-淀粉酶變體的DNA序列 的DNA構建體。

13.一種攜帶按照權利要求12的DNA構建體的重組表達載體。

14.一種用按照權利要求12的DNA構建體或按照權利要求13的載體 轉化的細胞。