[發明專利]用于犬和人埃利希病的免疫診斷的P153和P156抗原及其用途

無效

• 申請號: 200810087960.0
• 申請日: 2003-11-04
• 公開（公告）號: CN101294162A
• 公開（公告）日: 2008-10-29
• 發明（設計）人: J·W·麥克布里奇;D·H·沃克
• 申請（專利權）人: 研究發展基金會
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N15/63;C12N1/21;C12N5/10;C12Q1/04;C12Q1/68;C07K14/29;C07K16/12;A61K39/02;A61P31/04;G01N33/68
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 徐迅

本發明專利申請是國際申請號為PCT/US2003/034916，國際申請日為2003年11月4日，進入中國國家階段的申請號為“200380108238.6”，發明名稱為“用于犬和人埃利希病的免疫診斷的P153和P156抗原及其用途”的發明專利申請的分案申請。?

相關申請的交叉引用關系

本申請要求美國臨時專利申請60/423573的權益，該申請提交于2001年11月4日，現已放棄。?

聯邦資助說明

本發明部分依靠聯邦政府提供的資金，即國立過敏和傳染病研究所(National?Institute?of?Allergy?and?Infectious?Diseases)基金編號：AI31431而完成。因此，聯邦政府對于本發明享有一定權利。?

發明背景?

技術領域

本發明主要涉及分子和免疫診斷領域。更具體地，本發明涉及來源于犬埃利希氏體(Ehrlichia?canis)和恰菲埃利希氏體(Ehrlichia?chaffeensis)的種特異性免疫反應蛋白的直向同源物(～200kDA)，用于種特異性診斷犬埃利希病和人嗜單核細胞埃利希病。?

相關技術的描述

犬單核細胞埃利希病是一種潛在的致死性蜱傳播狗類疾病，該疾病主要是由立克次氏體(犬埃利希氏體(Huxsoll等人，1970))引起，在世界范圍內廣泛分布。犬埃利希氏體是一種專性細胞內細菌，表現出對單核細胞和巨嗜細胞的嗜性(Nyindo等人，1971)，能在脊椎動物宿主體內引起持續感染?(Harrus等人，1998)。該病的特征分三個階段：持續2-4周的急性感染階段；亞臨床感染階段，在此階段狗可能維持感染好幾年，但不顯現出任何臨床癥狀；此后是慢性階段，在此階段由于骨髓再生不良，很多狗的病況進行性惡化預后更差(Troy等人，1990)。?

犬埃利希氏體感染犬科動物引起埃利希病。犬埃利希病包括急性階段和慢性階段。急性階段的特征為發熱、漿狀的眼鼻排泄物、厭食、抑郁、和體重減輕。慢性階段的特征除了更嚴重的急性病臨床癥狀外，還有嚴重的全血細胞減少癥、鼻出血、血尿、糞便帶血。如果在疾病進程早期進行治療，狗對于強力霉素的治療反應良好。然而，慢性感染的狗對于該抗生素反應不佳。因此，早期診斷對于犬埃利希病的治療尤為重要。?

急性階段治療此疾病對其最佳預后很重要。血液學異常(諸如：白血球減少癥和血小板減少癥)常常可為犬埃利希病提供有用的證據，也是最初診斷的重要因素(Troy等人，1990)。然而，因為犬埃利希病的臨床表現是非種特異性的，這給診斷帶來了困難。?

用血清學方法，如：間接熒光抗體(IFA)檢測，來診斷犬埃利希病由于其簡便、可靠和成本效應(cost?effectiveness)低已經成為標準的方法(Troy等人，1990)。然而，間接熒光抗體檢測的缺點包括：該方法不能做出種特異性診斷，因為它與也感染狗的其它密切相關的埃利希體屬類(恰菲埃利希氏體，E.ewingii，Anaplasma?phagocytophilum，以及A.platys)會發生抗原交叉反應。主觀的解釋也可能由于交叉反應性抗原而得到假陰性或假陽性結果。據報道，已開發的種特異性檢測犬埃利希氏體的其它診斷方法，如聚合酶鏈式反應(PCR)，比細胞培養分離法更靈敏，但是這種方法需要專門訓練和昂貴的儀器(McBride等人，1996)。病原體的分離很費時，僅有少數幾家實驗室一直成功地使用這一方法。而且，采用這一方法來確定具體的病因，還需要其它檢測方法來鑒定該分離物。?

已報道犬埃利希氏體和恰菲埃利希氏體之間存在血清學交叉反應性抗原。一些主要的血清學交叉反應性蛋白的分子量為28-30kDa(Chen等人，1997；Rikihisa等人，1994)，現在已知這些蛋白是由同源性多基因家族所編碼(Ohashi等人，1998a，b)。在犬埃利希氏體和恰菲埃利希氏體中分別有22個和25個基因同源但不完全相同，而p28基因相同并進行了測序。在犬?埃利希氏體和恰菲埃利希氏體的P28蛋白之間觀察到類似的種內和種間菌株的同源性，從而解釋了這些蛋白所產生的血清學交叉反應性(McBride等人，1999)。?