[發明專利]一種新型高效多肽合成脫保護劑

有效

• 申請號: 200810085323.X
• 申請日: 2008-03-06
• 公開（公告）號: CN101525368A
• 公開（公告）日: 2009-09-09
• 發明（設計）人: 楊頂建;姜月霞
• 申請（專利權）人: 海南建邦制藥科技有限公司
• 主分類號: C07K1/06
• 分類號: C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明是涉及多肽合成，特別是多肽Fmoc固相合成中的氨基脫保護劑。

背景技術

1963年Merrifield成功地合成了多肽，因此多肽的固相合成逐漸發展。多肽合成是一個重復添加氨 基酸的過程，固相合成順序一般從C端(羧基端)向N端(氨基端)合成。先將組成目的肽的氨基酸改造 成氨基末端帶有保護基的氨基酸，在Boc和Fmoc合成法中氨基酸都是N-α-氨基酸保護的。羧基端是游離 的，并且在反應之前氨基端必須先脫保護和羧基端活化，然后縮合接長肽鏈。固相合成方法有兩種，即Fmoc 和Boc。Boc合成法用TFA酸脫保護，但不適用含有色氨酸等對酸不穩定的肽類的合成由于酸會使肽從樹 脂上脫落，損失嚴重，而且酸處理也會引起側鏈的副反應。Fmoc法克服以上缺點用弱堿性的哌啶/DMF＝1∶4 為脫保護劑，但此脫保護劑也不能很好地去氨基保護，影響下步的縮合反應，合成的多肽速率低、純度不 高，而且消耗的有機溶劑量也很大，生產成本高。

發明內容

為了避免多肽合成時不完全的脫保護和產生副反應而引起的多肽生產成本高、純度低的缺點。本發明 通過對脫保護劑配方的設計，提高氨基的去保護效率，合成高純度的多肽，并節約了生產成本。

本發明的技術方案是

配方：哌啶????????????0.1％-10％

??????DBU?????????????0.1％-5％

??????HOBt????????????0.5％-5％

??????Trition?x-100???0.1％-2％

其中溶劑為DMF，哌啶、DBU、Trition?x-100是體積比組分，HOBt是重量比組分。

通過在常規的脫保護劑哌啶/DMF中加入活化劑HOBt和表面活性劑Trition?x-100，催化劑DBU。HOBt 是活化劑，能使合成時反應快、消旋少、副反應少；Trition?x-100表面活性劑能使多肽舒展開，使脫保護 完全和高效接上下個氨基酸；DBU作為催化劑，是柔和的堿，易去除氨基保護基，而且哌啶在有DBU存 在下更促使氨基Fmoc保護基團脫除。

選用以上配方的合適比例范圍，節省了脫保護中使用有機試劑哌啶等用量，還高效地去除氨基保護， 并易縮合，從而使合成反應加快，合成高純度的多肽。

該配方的脫保護劑經過在多次多種多肽固相合成的試驗中，證明其效果比其他的脫保護劑明顯，合 成的多肽純度高。其中哌啶最適配比是0.5％-7％，DBU的最適配比是0.5％-3％，HOBt的最適配比是1 ％-2％，Trition?x-100的最適配比是0.5％-1％。

本發明的效益在于該脫保護劑可以高效地脫除氨基保護，促進縮合反應。使多肽合成速度加快，純度 高，減少了合成中有機試劑的使用量，降低了多肽合成的成本。

具體實施方式

實施例1

配方：哌啶0.5％，DBU?0.5％，HOBt?1％，Trition?x-100?0.5％，余量為DMF。

在胸腺α₁合成中使用該配方脫除氨基保護，經檢測，合成粗肽純度大于75％。在相同的實驗條件下， 使用傳統的脫保護劑，合成粗肽純度小于50％。

實施例2

配方：哌啶0.1％，DBU?0.1％，HOBt?0.5％，Trition?x-100?0.1％，余量為DMF。

在胸腺α₁合成中使用該配方脫除氨基保護，經檢測，最終粗肽純度大于70％。

在相同的實驗條件下，使用傳統的脫保護劑，最終粗肽純度小于50％。

實施例3

配方：哌啶10％，DBU?5％，HOBt?5％，Trition?x-100?2％，余量為DMF。

在胸腺α₁合成中用該配方脫除氨基保護，經檢測，合成粗肽純度大于70％，在相同的實驗條件下， 使用傳統的脫保護劑，合成粗肽純度小于50％。