[發(fā)明專利]發(fā)酵濾液中側耳素的提取方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810084608.1
• 申請日: 2008-03-13
• 公開（公告）號: CN101531592A
• 公開（公告）日: 2009-09-16
• 發(fā)明（設計）人: 潘貞德;孫玉勝;馬蘭;戴曉曦;王玉萬
• 申請（專利權）人: 邁德金生物技術（北京）有限公司
• 主分類號: C07C69/675
• 分類號: C07C69/675;C07C67/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及抗生素提取技術，是一種用鹽析法提取發(fā)酵濾液中殘留的短截側耳素。

背景技術

短截側耳素pleuromulin(以下稱側耳素)是由傘菌科的斜頂菌pleuarotus?mutifis經(jīng)液體發(fā)酵產(chǎn)生。側耳素主要是胞內(nèi)產(chǎn)物，但是還有約300～1000ug/ml側耳素被釋放到胞外，尤其是當發(fā)酵條件控制不當時其胞外側耳素可達2000ug/ml以上。回收發(fā)酵濾液中的側耳素可以提高收率降低側耳素的生產(chǎn)成本。側耳素在乙酸乙酯、4-甲基-2-戊酮等疏水溶劑中的溶解度大都在15％左右，從發(fā)酵濾液中萃取殘留的側耳素，溶劑用量大，成本分析表明單獨用溶劑萃取側耳素并不合算。本發(fā)明用氯化鈉、硫酸鈉等無機鹽采用鹽析的方法使側耳素從濾液中析出，或采用少量的溶劑并在濾液中加入少量的氯化鈉或硫酸鈉來萃取側耳素，可顯著的降低提取成本。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明技術是關于側耳素提取方法，其特征在于向含有側耳素的發(fā)酵濾液中加入足夠量的氯化鈉或硫酸鈉，從而使側耳素從濾液中析出，然后用離心或過濾的方法將析出的側耳素分離出來。一般而言，在發(fā)酵濾液中加入25～35％氯化鈉(重量/體積比)或加入10～25％硫酸鈉(重量/體積比)即可使側耳素的析出率達80～99％，隨著鹽的加入量越多側耳素析出率越高，當鹽在發(fā)酵濾液中達到飽和時，側耳素析出率為最大。

還可以在發(fā)酵濾液中加入少量的氯化鈉或硫酸鈉(大約在5～10％)，同時加入乙酸乙酯或4-甲基-2-戊酮等疏水性溶劑，進行萃取，由于鹽的加入可提高側耳素在有機相中的分配系數(shù)。同樣可以減少溶劑用量，降低提取成本。

具體實施方式

實例1、

發(fā)酵結束，發(fā)酵液用高壓板框壓濾，得含側耳素的菌素濾餅(干燥后，進一步用有機溶劑提取)和含少量側耳素(大于300ug/ml)的發(fā)酵濾液。向濾液中加入重量/體積比為35％的氯化鈉，充分攪拌使氯化鈉全部溶解，然后過濾或離心，即得含側耳素的粗提取物。經(jīng)HPLC分析，側耳素的回收率達99％。

實例2、

發(fā)酵結束，發(fā)酵液用高壓板框壓濾，得含側耳素的菌素濾餅(干燥后，進一步用有機溶劑提取)和含少量側耳素(大于300ug/ml)的發(fā)酵濾液。向濾液中加入重量/體積比為22％的硫酸鈉，充分攪拌使氯化鈉全部溶解，然后過濾或離心，即得含側耳素的粗提取物。經(jīng)HPLC分析，側耳素的回收率達99％。

實例3、

發(fā)酵結束，發(fā)酵液用高壓板框壓濾，得含側耳素的菌素濾餅(干燥后，進一步用有機溶劑提取)和含少量側耳素(大于300ug/ml)的發(fā)酵濾液。向濾液中加入重量/體積比為20％的氯化鈉，充分攪拌使氯化鈉全部溶解，然后過濾或離心，即得含側耳素的粗提取物。經(jīng)HPLC分析，側耳素的回收率達82～88％。

實例4、

發(fā)酵結束，發(fā)酵液用高壓板框壓濾，得含側耳素的菌素濾餅(干燥后，進一步用有機溶劑提取)和含少量側耳素(大于300ug/ml)的發(fā)酵濾液。向濾液中加入重量/體積比為15％的硫酸鈉，充分攪拌使氯化鈉全部溶解，然后過濾或離心，即得含側耳素的粗提取物。經(jīng)HPLC分析，側耳素的回收率達84～88％。

實例5、

發(fā)酵結束，發(fā)酵液用高壓板框壓濾，得含側耳素的菌素濾餅(干燥后，進一步用有機溶劑提取)和含少量側耳素(大于300ug/ml)的發(fā)酵濾液。向濾液中加入相當于濾液5％的4-甲基-2-戊酮和15％的硫酸鈉，充分攪拌萃取，然后靜置或離心分相，得含側耳素的有機相，萃取率達97％以上，不加入鹽的對照組，其萃取率為88％。