[發(fā)明專利]一種穿梭質(zhì)粒及其衍生質(zhì)粒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810084486.6
• 申請(qǐng)日: 2008-03-25
• 公開（公告）號(hào): CN101250548A
• 公開（公告）日: 2008-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁久元;李開;劉桂明;趙智;王宇;張英姿
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號(hào): C12N15/70
• 分類號(hào): C12N15/70;C12N15/77
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種穿梭質(zhì)粒及其衍生質(zhì)粒。

背景技術(shù)

質(zhì)粒是染色體外遺傳因子，能夠進(jìn)行自主復(fù)制。它并不是寄主細(xì)胞生命活動(dòng)必需的遺傳元件，但是能給予宿主細(xì)胞某些特殊的性質(zhì)，例如抗藥性，降解或利用某些化合物等。在分子生物學(xué)研究中，質(zhì)粒可以作為載體用于克隆外源基因。關(guān)于質(zhì)粒的研究已經(jīng)相當(dāng)深入，人們一方面不斷從自然界發(fā)現(xiàn)新質(zhì)粒，另一方面也不斷在已有質(zhì)粒的基礎(chǔ)上構(gòu)建衍生質(zhì)粒，作為基因工程的載體。

在細(xì)菌基因工程領(lǐng)域，絕大部分質(zhì)粒載體來自革蘭氏陰性菌大腸桿菌，許多已經(jīng)商品化。對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌谷氨酸棒桿菌質(zhì)粒的研究開始的較晚。1984年，先后報(bào)告了谷氨酸棒桿菌質(zhì)粒pBL1、pCG1、pCG2和pCG4等。(Santamaria.R.et?al?1984J.Gen.Microbiol.130.2237-2246.Ozaki.A?et?al?1984?Mol.Gen.Genet?196.175-178?Katsumata.R.et?al?1984?J.Bacteriol.159.306-311)目前已經(jīng)從各種棒桿菌中分離出24種內(nèi)源質(zhì)粒。這24種內(nèi)源質(zhì)粒中大部分小質(zhì)粒是隱蔽型的，僅質(zhì)粒pXZ10145是個(gè)例外，該質(zhì)粒帶有一個(gè)氯霉素抗性基因。(沈天翔等1993生物工程學(xué)報(bào)9.216-222)而在較大的質(zhì)粒中，也只有pAG1、pCG4和pTET3編碼抗生素抗性基因。根據(jù)谷氨酸棒桿菌可能的復(fù)制方式和復(fù)制起始蛋白之間的相似性，可以把它們分為兩組。一組是采取滾環(huán)方式復(fù)制，包括pBL1族質(zhì)粒和pCG1族質(zhì)粒；另一組采取θ復(fù)制方式復(fù)制，包括pXZ10145族質(zhì)粒和pCRY4族質(zhì)粒。一般來說，采取θ復(fù)制方式復(fù)制的質(zhì)粒較采取滾環(huán)復(fù)制的質(zhì)粒具有較高的穩(wěn)定性。在谷氨酸棒桿菌基因工程研究中，已構(gòu)建的克隆載體大部分源于隱蔽型質(zhì)粒pBL1(Miwa.K?et?al1985?Gene?39.281-286；Yeh.P?et?al?1986?Gene?47?301-306；Santamari.R.I.1987Gene?56?199-208；Patek.M.1989?Appl.Microbiol.Biotechnol.31.65-69；Nesvera.J.et?al?1990?Folia?Microbiol.35.273-277；Mukherjee.K.J.et?al1990.J.Biotechnol.16.109-122；Eikmanns.B.J.et?al?1991?Gene?102.93-98；Tauch.A.et?al?1998a?Arch.Microbiol.169.303-312；)；pCG1(Miwa.K.et?al?1985?Gene?39.281-286；Yoshihama.M.et?al?1985.J.Bacteriol.162.591-597；)；pCG2(Ozaki.A?et?al?1984.Mol.Gen.Genet?196.l75-178；Ikeda.M.and?Katsumata.R.1999.Appl.Environ.Microbial.65.2497-2502；)和.pCG4(Ikeda.M.and?Katsumata.R.1999.Appl.Environ.Microbial.65.2497-2502；)。卡那霉素、博來霉素、氯霉素和紅霉素的抗性基因的啟動(dòng)子均能被棒桿菌的DNA聚合酶識(shí)別，已經(jīng)被廣泛地用于載體構(gòu)建。另一方面，由于大腸桿菌的基因操作系統(tǒng)已經(jīng)比較成熟，目前在谷氨酸棒桿菌基因工程研究中使用的絕大多數(shù)克隆載體都是在大腸桿菌和谷氨酸棒桿菌之間均能復(fù)制的穿梭載體，并且?guī)в卸嗫寺∥稽c(diǎn)。但目前鮮有從具有θ復(fù)制機(jī)制的谷氨酸棒桿菌質(zhì)粒出發(fā)構(gòu)建克隆載體的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種穿梭質(zhì)粒及其衍生質(zhì)粒。

本發(fā)明所提供的一種穿梭質(zhì)粒，名稱為pAK6，它的核苷酸序列是序列表中的序列1。

pAK6是能夠在谷氨酸棒桿菌和大腸桿菌中復(fù)制的穿梭質(zhì)粒載體。