[發(fā)明專利]胱抑素C測定試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810084390.X
• 申請日: 2008-03-20
• 公開（公告）號: CN101377492A
• 公開（公告）日: 2009-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫國敬
• 申請（專利權(quán)）人: 北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/546
• 分類號: G01N33/546
• 代理公司: 北京戈程知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 程偉;陳迎春

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)免疫體外診斷領(lǐng)域，涉及一種免疫比濁檢測試劑， 進(jìn)一步地，本發(fā)明涉及一種膠乳顆粒增強(qiáng)型胱抑素C檢測試劑盒。

背景技術(shù)

胱抑素C(CystatinC)是一種低分子量蛋白質(zhì)，可由機(jī)體所有有 核細(xì)胞產(chǎn)生，產(chǎn)生率恒定。循環(huán)中的胱抑素C僅經(jīng)腎小球濾過而被清 除，是一種反映腎小球濾過率變化的理想的內(nèi)源性標(biāo)志物，而腎小球 的濾過率(glomerular?filtration?rate，GFR)是監(jiān)測腎功能的一個重要 指標(biāo)，尤其對于腎移植的病人，快速準(zhǔn)確的掌握腎小球濾過率的變化 是十分重要的。此外由于胱抑素C分子量大于肌酐，且?guī)д姾桑? 以它更容易反映腎小球濾過膜通透性的早期變化，可以在腎小球濾過 率輕微降低時升高，較肌酐更敏感，作為腎功能試驗優(yōu)于血清肌酐，具 有重要的臨床應(yīng)用價值。

胱抑素C，是一種由120個氨基酸殘基組成的分子量僅13KDa的 低分子量分泌性蛋白質(zhì)，是半胱氨酸蛋白酶抑制物超家族的成員之。 胱抑素C基因5′側(cè)翼序列與“看家基因”的啟動子區(qū)具有相同的特性， 也屬于“看家基因”即此基因在所有組織恒定持續(xù)地轉(zhuǎn)錄及表達(dá)，無組 織學(xué)特異性，廣泛地存在于各種體液中，如腦脊液、血液、唾液、精 漿等，機(jī)體胱抑素C產(chǎn)生率相當(dāng)恒定。而胱抑素C是一種低分子量蛋 白質(zhì)，可經(jīng)腎小球自由濾過，腎臟是清除循環(huán)中胱抑素C的唯一器官， 所以血清胱抑素C濃度主要由GFR決定，由此可見胱抑素C是一種理 想的反映GFR變化的內(nèi)源性標(biāo)志物。

臨床研究低分子量蛋白質(zhì)(β₂-微球蛋白、視黃醇結(jié)合蛋白、胱抑 素C)濃度與GFR(⁵¹Cr-EDTA清除率或其金標(biāo)準(zhǔn)^99mTc-DTPA清除率) 的相關(guān)性，血清胱抑素C、肌酐濃度診斷異常GFR的敏感性分別為 78.1％及57.1％，各自濃度倒數(shù)與GFR(⁵¹Cr-EDTA清除率)的相關(guān)系 數(shù)分別為：0.81、0.50。表明胱抑素C是低分子量蛋白質(zhì)中與GFR最 相關(guān)的內(nèi)源性標(biāo)志物，甚至優(yōu)于血清肌酐。血清β₂-微球蛋白濃度由于 在炎癥、腫瘤及免疫疾病時也可升高，故不是理想的GFR內(nèi)源性標(biāo)志 物。而胱抑素C即使在炎癥狀態(tài)下，其產(chǎn)生率也不會改變，血清濃度 受年齡、性別、疾病的病情變化的影響較小。說明胱抑素C的診斷準(zhǔn) 確性明顯優(yōu)于血清肌酐。

免疫濁度測定的基本原理是：抗原抗體在特殊緩沖液中快速形成抗 原抗體復(fù)合物，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。當(dāng)反應(yīng)液中保持抗體過量時，形 成的復(fù)合物隨抗原量增加而增加，反應(yīng)液的濁度亦隨之增加，與一系 列的標(biāo)準(zhǔn)品對照，即可計算出待檢測物的含量。但含量低的分子量小 的抗原抗體復(fù)合物極難形成濁度，除非放置較長時間；如形成較大的 復(fù)合物，則抗原和抗體用量也較大，顯然不符合微量化的要求。于是 發(fā)展了免疫膠乳濁度測定法，是在膠乳凝集定性試驗基礎(chǔ)上發(fā)展建立 的-種非放射性均相免疫濁度測定法，其基本原理是：將抗體吸附在大 小適中、均勻一致的膠乳顆粒上，當(dāng)遇到相應(yīng)抗原時，則使膠乳顆粒 發(fā)生凝集。單個膠乳顆粒在入射光波之內(nèi)不阻礙光線透過，兩個或兩 個以上膠乳顆粒凝聚時則使透過光減少，這種減少的程度與膠乳顆粒 凝聚的程度呈正比，當(dāng)然也與待測抗原量呈正比，由此可測出標(biāo)本中 待測物的含量。

由于血清中胱抑素C濃度較低，故其測定方法需較高的分析靈敏 度及特異性。最早采用單向免疫擴(kuò)散法(RID)及酶免疫測定法(EIA) 對胱抑素C含量進(jìn)行測定，而這兩種方法不僅費時，檢測限也較差。 較簡單且更靈敏的放射、熒光及各種酶免疫測定(RIA、FIA及EIA) 的方法能改善胱抑素C測定的可靠性，但測定時間仍較長，無法常規(guī) 應(yīng)用，更無法用于急診測定。以上各種測定方法均屬非均相測定方法， 很難自動化，因此限制了胱抑素C的廣泛臨床應(yīng)用。采用上述的膠乳 免疫均相測定方法，即在膠乳顆粒上包被抗體，與抗原結(jié)合時顆粒發(fā) 生凝集，此方法很容易自動化。Kabanda等于1994年報道的測定胱抑 素C的膠乳顆粒凝集法是一種顆粒計數(shù)免疫測定法。Kyhse?andersen 等于同年報道了一種顆粒增強(qiáng)透射免疫比濁法(particle-enhanced turbidimetric?immunoassay，PETIA)，使胱抑素C測定的時間縮短至 5min左右，且可在自動生化分析儀上進(jìn)行，使胱抑素C測定的常規(guī)應(yīng) 用成為可能。