[發明專利]超聲/微波協同萃取-HPLC檢測食品中的罌粟殼生物堿的方法

無效

• 申請號: 200810079608.2
• 申請日: 2008-10-23
• 公開（公告）號: CN101393176A
• 公開（公告）日: 2009-03-25
• 發明（設計）人: 王庭欣;李小亭;馮麗娟;趙志磊;吳廣臣;夏立婭;劉崢顥;龐艷蘋
• 申請（專利權）人: 河北大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 石家莊匯科專利商標事務所
• 代理人: 王 琪

技術領域

本發明涉及一種超聲/微波協同萃取-HPLC檢測食品中的罌粟殼生物堿的方法，屬于液相色譜分析技術領域。

背景技術

罌粟殼，為罌粟科植物罌粟(Papaver?somniferumL)的干燥果殼，含有罌粟堿、嗎啡、可待因、地巴因、那可汀等多種生物堿。罌粟殼具有斂肺、澀腸、止痛功效。吸食罌粟果殼及制品，可造成吸食者在心理、生理上產生很強的依賴性。罌粟殼的對機體作用似嗎啡，長期食用危害與吸食海洛因相似。因此國家將其列入麻醉藥品予以管制，禁止非法供應、運輸和使用。但社會上存在一些非法經營者，為了招攬顧客，在調味料中添加罌粟殼，消費者食用后有異香之感，在不知不覺中上癮、中毒。這種異常感覺正是罌粟殼中的嗎啡等生物堿刺激神經的一種反應，并非食物的味道。因此，加強相關食品的監督檢測非常必要。

文獻報道對食品中罌粟殼生物堿有薄層法(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)、免疫測定法(IMA)等。薄層法靈敏度1μg，高效液相色譜法(HPLC)靈敏度1.1ng但兩種方法檢測干擾嚴重；免疫測定法靈敏度高，但特異性差。

發明內容

本發明的目的在于提供一種靈敏度高、精密度并且操作簡單的超聲-微波協同萃取—高效液相法，檢測目標為罌粟殼中含有的嗎啡、可待因和罌粟堿，以確定被檢測食品中是否含有罌粟殼生物堿。

本發明的技術方案是這樣實現的：這種超聲/微波協同萃取-HPLC檢測食品中的罌粟殼生物堿的方法，其特征在于包括如下步驟：

A、萃取：取2mL待測樣品，加75％乙醇，酒石酸調pH至4，放進超聲—微波協同萃取儀70℃，萃取15分鐘；

B、過濾：萃取后的樣品過濾，殘渣用pH4.0的75％酸性乙醇洗滌2-3次，冷卻后用脫脂棉過濾，再用75％酸性乙醇洗滌1次，水浴揮發乙醇成糖漿狀，自然冷卻后用脫脂棉過濾，殘渣用10％的酒石酸溶液洗滌3-4次；

C、分離：合并濾液于分液漏斗中，用30mL和20mL石油醚脫脂兩次，水層用氨水調pH至9.0-9.5，再用比例為3:1的三氯甲烷:異丙醇混合液30ml、30ml和20ml萃取3次，每次靜置15min，合并萃取液，用無水硫酸鈉脫水后水浴揮發有機溶劑，加甲醇定容至5ml離心管中，進液相前用0.45μm的濾膜過濾，供色譜分析；

D、液相色譜分析：檢測目標為罌粟殼中含有的嗎啡、可待因和罌粟堿，

液相色譜條件為：柱溫30℃，流速1ml/min；

最大吸收波長：嗎啡210nm，可待因213nm，罌粟堿253nm；

流動相：

水相：0.005mol/L磷酸二氫鈉和0.00005mol/L磷酸氫二鈉緩沖溶液；

有機相：乙腈；

D-1、標準曲線制備：分別以嗎啡、磷酸可待因和鹽酸罌粟堿為對照品在上述色譜條件下稀釋進樣，得出嗎啡，可待因，罌粟堿的特征峰，以峰面積為縱坐標，標準樣品濃度為橫坐標繪制標準曲線；

D-2、樣品檢測：取步驟C處理好的樣品分別與嗎啡、磷酸可待因和鹽酸罌粟堿對照品相同的條件進樣，得出檢測樣品的譜圖及標準曲線，從而確定樣品中是否含有罌粟殼生物堿及含量。

所述超聲/微波協同萃取-HPLC檢測食品中的罌粟殼生物堿的方法，步驟D-1中嗎啡標準曲線制備包括：

對嗎啡的色譜圖峰形進行優化，在標準品濃度為0.5-10μg/mL梯度為：

將嗎啡標準品稀釋為0.5、1、2、4、6、8、10μg/mL，在上述色譜條件下，平行測定每個標準樣品3次，繪制標準樣品濃度與峰面積的關系曲線，得回歸方程y＝42.92×-3.9387，相關系數R²＝0.gg9934。

所述超聲/微波協同萃取-HPLC檢測食品中的罌粟殼生物堿的方法，其特征在于步驟D-1中磷酸可待因標準曲線制備包括：

對磷酸可待因的色譜圖峰形進行優化，在濃度為0.2-10ug/mL梯度為：

將可待因標準品稀釋為0.2、0.4、0.6、0.8、2、4、6、8、10μg/mL，在上述色譜條件下，平行測定每個標準樣品3次，繪制標準樣品濃度與峰面積的關系曲線，得回歸方程y＝31.606×-1.6496，相關系數R²＝0.999940。

所述的超聲/微波協同萃取-HPLC檢測食品中的罌粟殼生物堿的方法，步驟D-1中鹽酸罌粟堿標準曲線制備包括：

對罌粟堿的色譜圖峰形進行優化，在濃度為0.2-10ug/mL梯度為：