[發(fā)明專利]用單一培養(yǎng)基生產(chǎn)羅漢果組培苗的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810073435.3
• 申請日: 2008-01-24
• 公開（公告）號: CN101218896A
• 公開（公告）日: 2008-07-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許鴻源
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務(wù)所有限責(zé)任公司
• 代理人: 翁建華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬用單一培養(yǎng)基生產(chǎn)羅漢果組培苗的方法。

技術(shù)背景

羅漢果Siraitia?grosvenori(Swingle)C.Jeffrey，又叫漢果、拉汗果、長壽果、神仙果、羅晃子、假苦瓜、光果木鱉等，為葫蘆科Cucurbitaceae羅漢果屬Siraitia?Merr多年生草質(zhì)藤本，雌雄異株植物，我國原產(chǎn)，也是我國、更是廣西最重要的傳統(tǒng)特產(chǎn)中藥材之一，在醫(yī)療與保健方面有很高的應(yīng)用價值和廣泛的開發(fā)前景。在廣西桂北地區(qū)多把羅漢果作為支柱產(chǎn)業(yè)發(fā)展。廣東、江西、湖南、貴州等省的部分市縣也在積極發(fā)展羅漢果種植。由于組培苗可以在平地種植，打破了千百年來羅漢果只能在一定海拔的山坡種植的傳統(tǒng)，而且在種植過程中能有效控制病害、尤其是病毒的傳播，可實(shí)現(xiàn)當(dāng)年栽種當(dāng)年結(jié)果，適宜規(guī)模化種植，近年來在羅漢果種源供應(yīng)市場中已經(jīng)占據(jù)絕對的主導(dǎo)地位。但是，從上世紀(jì)末羅漢果組培苗商品化以來，羅漢果組培苗的生產(chǎn)單位幾乎無一例外地都選用細(xì)胞分裂素中的6-BA(N⁶-BA，N⁶-芐基腺嘌呤)作為主導(dǎo)生長調(diào)節(jié)劑。然而6-BA卻不能單獨(dú)使用，還必須再添加IAA(吲哚乙酸)、NAA(萘乙酸)或IBA(吲哚丁酸)等生長素類調(diào)節(jié)劑，分別復(fù)配成“腋芽外植體啟動”、“增殖擴(kuò)繁”和“增殖苗生根”等三種成分各不相同的培養(yǎng)基才能完成全部組培苗生產(chǎn)程序。更麻煩的是，6-BA在羅漢果組培中的生物學(xué)效應(yīng)與其在其他植物組培中有顯著不同，只要是在有效使用濃度內(nèi)，就會難以避免地誘導(dǎo)大量愈傷組織的發(fā)生，并且出現(xiàn)在組培苗生產(chǎn)的全過程。從遺傳學(xué)考慮，大量愈傷組織的發(fā)生會影響組培苗的遺傳穩(wěn)定性，最終導(dǎo)致各種劣質(zhì)變異和大田栽培中不良事件(如抗性低下、不能正常開花結(jié)果等)的發(fā)生，給組培苗的生產(chǎn)者和種植者都帶來極大的潛在風(fēng)險和損失。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種用單一培養(yǎng)基完成羅漢果組培苗生產(chǎn)的方法。

本發(fā)明以如下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題：

將狹霉素0.1～0.5mg·L^-1加入到常規(guī)MS固體培養(yǎng)基中進(jìn)行羅漢果組培苗生產(chǎn)。

由于單用狹霉素配制成的培養(yǎng)基可以同時用于“腋芽外植體啟動”、“增殖擴(kuò)繁”及“增殖苗生根”各技術(shù)環(huán)節(jié)，從而使得羅漢果組培苗的生產(chǎn)操作程序大為簡化。特別是狹霉素能有效控制羅漢果組織培養(yǎng)過程中愈傷組織的發(fā)生，有利于遺傳穩(wěn)定性，從而提高組培苗的質(zhì)量。

具體實(shí)施方式

申請人經(jīng)多年反復(fù)研究，利用狹霉素同時具有植物細(xì)胞分裂素和生長素兩類生長調(diào)節(jié)劑生物活性的特性，發(fā)現(xiàn)將狹霉素0.1～0.5mg·L^-1添加到MS(Murashige-Skoog)固體培養(yǎng)基中，無需再添加任何其他激素或調(diào)節(jié)劑，就能促進(jìn)羅漢果腋芽外植體正常萌發(fā)生長，并誘導(dǎo)不定根發(fā)生，同時顯著抑制和推遲愈傷組織的形成。因此，用MS+狹霉素0.1～0.5mg·L^-1這種單一的培養(yǎng)基就能替代常規(guī)用的三種培養(yǎng)基才能完成的羅漢果組培苗生產(chǎn)全過程。既可簡化生產(chǎn)程序，又能提高組培苗質(zhì)量。

以下是分別用單一培養(yǎng)基和常規(guī)的三種培養(yǎng)基進(jìn)行羅漢果組培苗生產(chǎn)的方法和結(jié)果比較：

1.在“腋芽外植體啟動”期：

除了培養(yǎng)基成分不同外，用單一培養(yǎng)基和常規(guī)的三種培養(yǎng)基進(jìn)行羅漢果組培苗生產(chǎn)的培養(yǎng)條件都相同，具體為：

從防蟲網(wǎng)內(nèi)的無病毒健康植株的2級或3級側(cè)蔓上采取帶腋芽的單節(jié)莖段作外植體，按照植物組織培養(yǎng)的常規(guī)操作程序，分兩組分別作兩種不同培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)。每組30瓶，每瓶1個外植體。兩組培養(yǎng)基均含蔗糖3％，瓊脂粉4.5g·L^-1，調(diào)pH?5.8～6.2。培養(yǎng)溫度：晝/夜28/22(±2)℃，光照15001x，11h/d。

結(jié)果是：

(1)培養(yǎng)基是MS+狹霉素0.1～0.5mg·L^-1的一組，培養(yǎng)20～25d，成苗率達(dá)80～100％，莖葉形態(tài)正常，株高達(dá)3～4cm，且很少發(fā)生愈傷組織。培養(yǎng)至15～25d，就陸續(xù)有不定根發(fā)生，建成完整植株。

(2)培養(yǎng)基是MS+6-BA0.1～0.5mg·L^-1的一組，培養(yǎng)20～25d，，成苗率僅20～30％，而且葉片奇小，不能正常建成，需再添加適量IAA等生長素，才能使葉片正常建成，同時有大量愈傷組織發(fā)生，卻很難有不定根發(fā)生。

2.在“增殖擴(kuò)繁”期：