[發明專利]誘導藥用阿魏愈傷組織及肧狀體再生的技術

有效

• 申請號: 200810072820.6
• 申請日: 2008-02-05
• 公開（公告）號: CN101228849A
• 公開（公告）日: 2008-07-30
• 發明（設計）人: 李曉瑾;朱軍;賈曉光;凱撒·蘇萊曼;石明輝;王果平;阿依別克·熱河木都拉;姜林
• 申請（專利權）人: 新疆維吾爾自治區中藥民族藥研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C12N5/06
• 代理公司: 石河子恒智專利代理事務所
• 代理人: 李伯勤

技術領域

本發明涉及一種誘導藥用阿魏愈傷組織及肧狀體再生的技術。

技術背景

新疆藥用阿魏(Ferula?sinkiangensis?K.M.shen)屬傘形科阿魏屬(Ferula?L.)植物，是我國人民應用歷史悠久的中藥材之一。早在《唐本草》中就有記載，在其后有關藥物的書籍中，如明朝李時珍的《本草綱目》和清朝吳其浚的《植物名實圖考》中，都有阿魏的記載。歷版《中華人民共和國藥典》都予以收載，植物種源為新疆阿魏和阜康阿魏，具有消積散痞、祛濕止痛、殺蟲的功效。是新疆特有珍稀藥用植物資源。

新疆藥用阿魏屬早春植物，為多年生一次結果草本植物，多生長在戈壁荒漠地帶的春牧場。阿魏藥材是從新疆阿魏或阜康阿魏的根或莖中得到的一種油膠樹脂之風干塊狀物，民族醫用其根治病，這種藥材采收方式，使得植株難以結籽繁衍，加速了資源的萎縮。近年來，由于草場超載、干旱、過渡采挖，特別是大面積的開荒，致使新疆阿魏資源銳減，處于瀕危的邊緣。

因此，研究新疆藥用阿魏人工繁殖技術，對保護新疆野生藥物資源，維持生物多樣性，為醫藥行業提供穩定、可持續利用的藥材資源具有重要的意義。

發明內容：

本發明的目的是提供一種以阿魏幼苗為材料，誘導愈傷組織及其再生肧狀體，并進行繼代培養，進而可實現人工規模化繁殖阿魏。

本發明主要包含以下過程：

取阿魏幼苗用水沖洗干凈，然后用50～85％酒精20～40s、0.05～0.15％升汞2～4min中的至少一種浸洗消毒，然后用無菌水洗滌去消毒殘液，切成0.5～1.0cm塊在培養皿中接種于培養基上，置于18～25℃下培養5天以上即可；

上述的培養基的配制如下：

選用MS為基本培養基，所述培養基用0.1mol/LNaOH或0.1mol/LHCl溶液進行調節至pH為5.5～6.5。

作為進一步改進的技術方案，上述的培養基中最好加入激素2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)0.1～1.0mg/L、NAA(奈乙酸)0.1～3.0mg/L、KT(激動素)0.5～3.0)mg/L、6-BA(6-芐基嘌呤)0.5～3.0mg/L、GA₃0.1～1.0mg/L之中的一種或幾種。

上述的培養基的優選組合為下列中至少一種：

MS+2，4-D0.1～1.0mg/L+KT1.0～2.0mg/L；

MS+NAA0.1～1.5mg/L+6-BA0.5～2.5mg/L；

MS+NAA0.1～1.5mg/L+6-BA0.5～3.0mg/L+GA₃0.1～1.0mg/L。

上述的培養基中最好添加5～9g/L的瓊脂條，20～40g/L的蔗糖中的一種或幾種。

上述的阿魏幼苗可以為實生苗，也可為無性繁殖所得幼苗，最好選擇一片真葉以內的幼苗，優選為無真葉的幼苗，最佳為幼苗的下胚軸部分

本發明以新疆阿魏實生或非實生苗為材料，誘導愈傷組織，并進行繼代培養，為利用植物組織培養和細胞培養法繁殖珍稀物種，特別是在開發利用生長周期長、資源稀少的藥用植物方面，提供了一條新的途徑，對保護新疆野生藥物資源，維持生物多樣性，為醫藥行業提供穩定、可持續利用的藥材資源具有重要的意義，尤其為今后應用生物技術繁育新疆阿魏并進行規模化種植奠定了基礎。

具體實施方式：

實施例1：

取實生未生出真葉的阿魏幼苗用水沖洗干凈，經50～85％的酒精消毒20～40s，再用0.05～0.15％升汞2～4min浸洗消毒，用無菌水沖洗數次，取其肧軸部分切成0.5～1.0cm塊接種在MS附加2，4-D0.1～1.0mg/L+KT1.0～2.0mg/L中，18～25℃暗培養5～10天左右即可發現接種組織塊膨大，這時將膨大組織塊用解剖刀豎直劈開繼代培養15～30天左右即可誘導出愈傷組織，出愈率為30～70％。

實施例2：

取實生一片真葉以內的阿魏幼苗用水沖洗干凈，經50～85％的酒精消毒20～40s，再用0.05～0.15％升汞2～4min浸洗消毒，用無菌水沖洗數次，取其肧軸部分切成0.5～1.0cm塊接種在MS附加2，4-D0.1～1.0mg/L+KT1.0～2.0mg/L中，18～25℃暗培養，5～10天左右接種組織塊膨大。

實施例3：

與實施例1相比，本實施例的不同是將誘導產生的阿魏愈傷組織轉接到MS附加NAA0.5～1.5mg/L和6-BA1.0～3.0mg/L培養基中愈傷組織增值較快，15～30天可增值2～4倍。