[發明專利]抗腫瘤化合物去乙酰真菌環氧乙酯的發酵基質

無效

• 申請號: 200810071738.1
• 申請日: 2008-09-08
• 公開（公告）號: CN101353678A
• 公開（公告）日: 2009-01-28
• 發明（設計）人: 沈月毛;張偉;黃耀堅;宋思揚;鄭忠輝;蘇文金
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18;A61P35/00;C12R1/645
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及一種化合物的發酵基質，尤其是涉及一種抗腫瘤化合物去乙酰真菌環氧乙酯(Deacetyl-mycoepoxydiene)的發酵基質。

背景技術

化合物2-(8-甲基-9-氧雜-雙環[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氫-2H-吡喃酮(Deacetyl-mycoepoxydiene，俗稱去乙酰真菌環氧乙酯)，最早見于本申請人于2007年的報道，本申請人在公開號為CN1903858的發明專利申請提供一種抗腫瘤化合物去乙酰真菌環氧乙酯及其制備方法，是一種結構新穎，用擬莖點霉A-1-2-3代謝產生的去乙酰真菌環氧乙酯與制法及在抗腫瘤藥物或其他生物活性先導物中的應用。分子式為C₁₄H₁₆O₄，制備時取菌種接種于培養基培養至發酵，加入乙酸乙酯、甲醇和乙酸混合溶劑，收集提取液減壓濃縮至膏狀，用水分散，萃取至無色，分別得石油醚、乙酸乙酯、正丁醇相浸膏。再分離，裝柱，濃縮，洗脫，收集合并各個組分進行反相硅膠柱分離。取反相硅膠，裝柱，洗滌，洗脫，收集每個柱體積的洗脫液，濃縮至干，收集第2個組分進行凝膠柱層析分離，取凝膠，裝柱，洗脫，收集各組分。反復洗滌直至晶體表面無色素附著。該申請的發明人沈月毛等從福建省漳州市九龍江口浮宮鎮草埔頭(地名)紅樹林生態區的紅樹植物秋茄葉片中分離得到的菌株A123，經鑒定為擬莖點霉(Phomosis?sp.)。該菌株已保藏于中國典型培養物保藏中心，登記入冊的保藏編號為CCTCC?NO：M206060，保藏的培養物名稱及注明的鑒別特征為擬莖點霉(Phomosissp.)，保藏日為2006年6月26日。

擬莖點霉(Phomosis?sp.)A123該屬真菌為植物寄生菌(見裘緯蕃主編，菌物學大全[M]，北京：科學出版社，1998)，該菌株在20％海水配方馬鈴薯瓊脂培養基(PDA)培養基上，生長良好，菌絲純白，無明顯色素產生，不產孢子，培養10d以后，產生黑色子座。

未見有與本申請專利相同的發酵培養基配方的報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用擬莖點霉(Phomosis?sp.)A123菌株發酵真菌(參見公開號為CN1903858的發明專利申請)為代謝產物Deacetyl-mycoepoxydiene的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環氧乙酯的發酵基質及其發酵方法。

本發明所述的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環氧乙酯的化學名：2-(8-甲基-9-氧雜-雙環[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氫-2H-吡喃酮，其分子式為C₁₄H₁₆O₄，結構式為：

本發明所述的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環氧乙酯的發酵基質的組成為：按質量/體積比，葡萄糖為40～95g/L，馬鈴薯為100～300g/L，VB₁為2～10mg/L，甘露醇為8～20g/L；按體積百分比，陳海水為12％～25％，水補足1L，pH自然。

本發明所述的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環氧乙酯的發酵基質的發酵方法為：

1)將馬鈴薯去皮，切成小塊，加水煮沸，取汁液連同配方中其它成分混合均勻；

2)滅菌后，接種菌株A123，攪拌發酵，發酵液經過濾，除去菌體，收集發酵液用有機溶劑攪拌萃取，收集萃取所得的有機相，減壓濃縮至干即為目標產物。

所述加水煮沸的時間最好為0.5h。

所述攪拌發酵最好在26～28℃通氣攪拌發酵14～18d；所述攪拌萃取的時間最好為12～36h，所述減壓濃縮的溫度最好為45℃。

與現有的發酵培養基相比，由于本發明所述的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環氧乙酯的發酵基質其組成合理，因此采用本發明所述的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環氧乙酯的發酵基質，通過常規的發酵技術，所發酵的Deacetyl-mycoepoxydiene產量可達150～200mg/L。

具體實施方式

以下實施例將對本發明作進一步的說明。

實施例1

培養基配制：培養基的配方為馬鈴薯170g，葡萄糖85g，VB₁5mg，甘露醇14g，陳海水200ml，水補足1L，pH自然。

發酵時，將上述培養基滅菌后，接種A123菌株，28℃發酵18d。發酵液經過濾，除去菌體，收集發酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取3遍，每遍萃取12h，收集萃取所得的有機相，45℃濃縮至干即為本品的粗提物。

實施例2