[發明專利]壇紫菜幼苗的低溫冷藏保存方法

無效

• 申請號: 200810071524.4
• 申請日: 2008-08-01
• 公開（公告）號: CN101326905A
• 公開（公告）日: 2008-12-24
• 發明（設計）人: 陳昌生;謝潮添;紀德華;徐燕
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: A01N3/00
• 分類號: A01N3/00
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及一種壇紫菜，尤其是涉及一種水產養殖領域的壇紫菜幼苗的低溫冷藏保存方法。

背景技術

壇紫菜(Porphyra?haitanensis)是我國特有的暖溫帶性品種，是福建、浙江和廣東沿海人工養殖的重要經濟紅藻，其產量約占全國紫菜總產量的80％。

壇紫菜藻種的低溫保存，已有大量的研究，現在對壇紫菜葉狀體一般采用先進行陰干處理，后置于-20～-30℃冰箱中冷凍保存的方法，但是在進行壇紫菜遺傳育種研究時，經常需要大批量處理每次實驗結束后的幼芽或幼苗。由于幼苗比較小且較脆弱，冷凍前的分離和陰干工作比較麻煩、工作量大。而且隨著紫菜細胞工程育苗技術的發展，也經常需要保存大量壇紫菜幼苗，以用于后續葉狀體的酶解育苗。因此能否采用幼苗帶水直接冷藏，并達到與葉狀體陰干冷藏相同的效果，已經引起藻類學者的關注。目前，有關紫菜葉狀體的鮮活帶水冷藏，尚未見過報道。

公告號為CN1565168的發明專利提供一種利用人工誘變、體細胞克隆和單性生殖等選育壇紫菜良種，通過化學或物理人工誘變法獲得壇紫菜的變異細胞，用生物工具酶將變異細胞單個分離并將其培養成完整葉狀體。依據葉狀體的主要光合色素和色素蛋白質含量的高低和它們相互間的比值，游離氨基酸含量高低，生長速度，藻體的厚薄和色澤等指標，篩選出優良突變體葉狀體，并將它們再次酶解獲得單離體細胞進行再生培養。將獲得的幼小葉狀體單個分離，培養至大葉狀體，利用單性生殖獲得純系絲狀體。優良品系的純系絲狀體的F1代葉狀體，其優良性狀經遺傳穩定性分析和綜合品質測定后，對優良品系的純系自由絲狀體進行擴增培養，并移植于貝殼內使之成為貝殼絲狀體，隨后，進行用貝殼絲狀體進行大田采苗和養殖試驗。經大田試驗證明為性狀穩定的優良品系，以自由絲狀體的方式進行長期保存和推廣應用。

發明內容

本發明的目的是提供一種壇紫菜幼苗的低溫冷藏保存方法。

本發明包括以下步驟：

1)配制冷藏保護劑；

2)將冷藏保護劑分裝于凍存管中；

3)收集壇紫菜幼苗；

4)將收集到的壇紫菜幼苗置于裝有冷藏保護劑的凍存管中；

5)將裝有冷藏保護劑的凍存管冷藏。

所配制的冷藏保護劑最好采用鹽度為25‰的消毒海水配制，按體積百分比，甘油為10％，二甲基亞砜(DMSO)5％，葡萄糖15％，余為消毒海水。凍存管最好為50ml凍存管。每個50ml凍存管中最好裝冷藏保護劑30ml。壇紫菜幼苗最好為1～3cm的鮮活壇紫菜幼苗。所述冷藏最好將裝有冷藏保護劑的凍存管密封置于-20～-25℃冰箱中保存。

收集到的壇紫菜幼苗直接置于裝有冷藏保護劑的凍存管中即可，無需陰干處理。

當需要復蘇時，將裝有冷藏保護劑的凍存管置于水浴中解凍，即可取出。取出凍存管中的壇紫菜幼苗，經消毒海水洗滌后，即可進行恢復培養。水浴的溫度最好為20℃，水浴中解凍的時間可為15min，消毒海水洗滌的次數最好2～4次。復蘇后的壇紫菜幼苗，經恢復培養，低溫冷藏180d的鮮活壇紫菜幼苗，存活率仍然可達95％以上。

由于本發明使用冷藏保護劑對壇紫菜幼苗進行鮮活保存，因此避免了常規低溫保存時，需對葉狀體進行分離、陰干處理等工作，大大節省了工作量，也提高了壇紫菜葉狀體低溫冷藏的存活率。

具體實施方式

假設在壇紫菜遺傳育種時，通過壇紫菜殼孢子的放散、萌發獲得了大量壇紫菜幼苗，在無法及時對各株壇紫菜幼苗進行單株培養，以考察各株壇紫菜的經濟性狀時，即可采用該方法對壇紫菜鮮活幼苗進行低溫冷藏。具體步驟如下：

1)用鹽度為25‰的消毒海水配制冷藏保護劑，按體積百分比，含10％甘油，5％DMSO，15％的葡萄糖，70％消毒海水；

2)將配制好的冷藏保護劑取30ml，分裝于50ml凍存管中；

3)將1～3cm的壇紫菜鮮活幼苗直接置于裝有冷藏保護劑的凍存管中；

4)將凍存管密封后，置于-20～-25℃冰箱中保存。

存儲一段時間后，需使用這些幼苗時，即可將凍存管從冰箱中取出，進行復蘇培養：將凍存管從冰箱中取出，直接置于20℃水浴中解凍；15min后，將凍存管從水浴中取出，經消毒海水洗滌3次，即可置于培養瓶中進行單株培養。保存時間在180d以內的壇紫菜幼苗，存活率可達95％以上。