[發明專利]一種睪丸酮叢毛單胞菌工程菌及應用

無效

• 申請號: 200810071022.1
• 申請日: 2008-05-08
• 公開（公告）號: CN101302489A
• 公開（公告）日: 2008-11-12
• 發明（設計）人: 潘大仁;陳建秋;周以飛
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/31;C12N15/74;B09C1/10;A62D3/02;C12S13/00;C12R1/01;A62D101/28
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1、一種睪丸酮叢毛單胞菌工程菌，其特征在于該菌為睪丸酮叢毛單胞菌工程菌(Comamonas?testosteroni?AMCa3)CGMCC?No.2364。

2、根據權利要求1所述的一種睪丸酮叢毛單胞菌工程菌，其特征在于

①基因組DNA中具有tac啟動子，其序列為序列表中SEQ?ID?NO：1中所示的堿基序列；

②基因組DNA中具有pK18序列，該序列為序列表中SEQ?ID?NO：2中所示的堿基序列。

3、根據權利要求1或2所述的一種睪丸酮叢毛單胞菌工程菌，其特征在于具有卡那霉素抗性。

4、一種睪丸酮叢毛單胞菌工程菌的構建方法，其特征在于構建步驟如下：

①C.test?activator基因的克隆；

②含有tac強啟動子的目的基因質粒載體pKtacl-actl的構建；

③目的質粒載體電穿孔轉化細菌C.test；

④睪丸酮叢毛單胞菌工程菌的PCR與Southern?blot篩選驗證；

⑤睪丸酮叢毛單胞菌工程菌關鍵降解酶基因的表達量檢測；

⑥睪丸酮叢毛單胞菌工程菌其它降解酶基因的表達量檢測。

5、一種睪丸酮叢毛單胞菌工程菌的培養方法，其特征在于將睪丸酮叢毛單胞菌工程菌接種于添加了60μg/mL的氨芐青霉素和30μg/mL的卡那霉素的培養基中，進行搖床振蕩培養，轉速為180r/min，培養溫度30℃，培養8～12小時；所述培養基為M8無機鹽培養基、或M9無機鹽培養基、或LB培養基。

6、根據權利要求5所述的一種睪丸酮叢毛單胞菌工程菌的培養方法，其特征在于所述M8無機鹽培養基的配制方法如下：取12.8gNa₂HPO₄.7H₂O，3g?KH₂PO₄，2.5g?NaCl，5.0g?NH₄Cl，2mL?1M?MgSO₄，0.1mL?1MCaCl₂，0.2g?Yeast?Extact，加蒸餾水至1L，用NaOH或HCl調節pH值至7.0，120℃條件下滅菌18分鐘，冷卻后加入終濃度為0.27mg/L的Steriod，4℃保存備用。

7、根據權利要求5所述的一種睪丸酮叢毛單胞菌工程菌的培養方法，其特征在于所述M9無機鹽培養基的配制方法如下：取12.8gNa₂HPO₄.7H₂O，3g?KH₂PO₄，2.5g?NaCl，5.0g?NH₄Cl，2mL?1M?MgSO₄，0.1mL?1MCaCl₂，0.2g?Yeast?Extact，5g?Acetate，加蒸餾水至1L，用NaOH或HCl調節pH值至7.0，120℃條件下滅菌18分鐘，4℃保存備用。

8、一種如權利要求1所述的睪丸酮叢毛單胞菌工程菌，在降解類固醇化合物上的應用。