[發明專利]甲胎蛋白陰性的肝癌患者血清特異蛋白及其應用

無效

• 申請號: 200810070667.3
• 申請日: 2008-02-28
• 公開（公告）號: CN101354378A
• 公開（公告）日: 2009-01-28
• 發明（設計）人: 葉韻斌;陳強;陳慧菁;周東;郝明志;劉枋;余家密;林海瀾
• 申請（專利權）人: 福建省腫瘤醫院
• 主分類號: G01N27/64
• 分類號: G01N27/64;G01N33/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，尤其是涉及了一種新的腫瘤標志物-肝癌早期血清特異蛋白，可在體外檢測肝癌甲胎蛋白陰性患者發生肝癌的可能性。

背景技術

肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，是我國位居第二的癌癥“殺手”，常見于中年男性。因其惡性度高、病情進展快，病人早期一般沒有什么不適，一旦出現癥狀就診，往往已屬中晚期。故治療難度大、療效差，一般發病后生存時間僅為6個月，人稱“癌中之王”。早期肝癌可無癥狀體征，常見癥狀有：肝區疼痛、納差、消瘦、乏力以及不明原因的發熱、腹脹、腹瀉、黃疸等。

肝癌具有起病隱匿、潛伏期長、高度惡性、進展快、侵襲性強、易轉移、預后差等特點。其發病率有逐年上升趨勢。因此早發現，早診斷，早治療是減輕肝癌患者痛苦的一大幫助，目前只有掌紋診斷能達到這樣的水平。現在最常用的肝癌診斷標志物是甲胎蛋白AFP，它能在肝癌出現癥狀之前的8個月就已經升高，此時大多數肝癌病人仍無明顯癥狀，腫瘤也較小，這些患者經過手術治療后，預后得到明顯改善。然而，正常懷孕的婦女、少數肝炎和肝硬化、生殖腺惡性腫瘤等情況下甲胎蛋白也會升高；另外，仍有30％的肝癌病人其甲胎蛋白值是正常的。這些情況都給傳統的利用甲胎蛋白進行肝癌診斷的方法提出了難題。因此，迫切需要開發新的更有效的方法對甲胎蛋白陰性的疑似肝癌病人患肝癌的可能性進行預測與評估。

蛋白質是生命活動的最終執行者，腫瘤細胞基因的改變最終也都會反映在蛋白質的改變上，因此在腫瘤細胞的發生、發展以及侵襲轉移過程中必定伴隨著蛋白質種類與數量的改變，并且這些蛋白質有可能釋放入血。從理論上講，通過檢測血清中蛋白質的動態變化就有可能篩查出與腫瘤相關的蛋白質，作為疾病早期的指標對腫瘤發生的危險性進行早期評估。近幾年來，蛋白質組學的快速發展使我們從血清中尋找腫瘤特異相關蛋白質成為可能，尤其是質譜技術的產生，憑借其高靈敏度、高通量、快速簡便等優點，已經成為.微量蛋白質檢測的最重要手段之一。

SELDI-TOF-MS即蛋白質芯片和質譜技術相結合的表面增強激光解吸電離飛行時間質譜儀技術，該技術中的蛋白質芯片具有高度并行性、高通量、微型化和自動化等其他方法難以比擬的優越性，同時該芯片采用光敏染料標記，靈敏度高，準確性好，使篩選低豐度小分子蛋白質甚至肽成為現實，彌補了傳統方法如色譜、光譜、凝膠電泳等技術的不足，對篩選和鑒定新的腫瘤相關特異性標志物產生了巨大的影響。同時，該質譜技術可以直接對血清樣品進行鑒定，方便快速，半天即可得出結果，提供了臨床應用的價值。

從包括中國專利在內的有關資料檢索表明，自2001年以來，應用SELDI技術對血清樣品進行檢測來尋找新的腫瘤標志物用于腫瘤的早期診斷，成為了腫瘤研究的熱點之一。美國的多家蛋白質組學研究機構已用該技術分別對卵巢癌、前列腺癌等體液樣本進行了研究，發現了新的標志物，其特異性和靈敏度均優于現有的檢測方法。國內也應用該技術對肺癌、結直腸癌、乳腺癌、肝癌等部分腫瘤進行了研究，得到了一些腫瘤標志物，取得了一些成果和專利，如專利申請號為200410053632.0，200410066304.4，200510080787.8等。但目前尚未發現專門針對甲胎蛋白陰性患者的血清蛋白標志物，因此應用質譜技術對甲胎蛋白陰性的肝癌患者血清進行分析來獲得特異腫瘤標志物，結合甲胎蛋白可以大大提高肝癌的檢出率，具有重要的意義。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的是建立一套有效的方法，用于在分離的血清中體外檢測甲胎蛋白陰性的患者發生肝癌的風險性進行評估。即應用SELDI-TOF-MS技術，通過建立甲胎蛋白陰性肝癌患者與健康對照之間血清蛋白質的指紋圖譜，并進行差異分析，尋找新的蛋白質標志物，從而對肝癌進行更全面的早期篩查和檢測。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：本發明提供了一種從分離的外周血血清中體外檢測甲胎蛋白陰性的肝病患者發生肝癌危險性的方法，該方法包括下列步驟：

(a)制備甲胎蛋白陰性肝癌患者的血清樣本；

(b)利用表面增強激光解吸電離飛行質譜技術(SELDI-TOF-MS)檢測血清樣品，獲得血清蛋白質譜圖；

(c)采用Biomarker?Wizard和Biomarker?Pattern軟件對數據進行分析處理；

(d)確定該血清所獲自的患者發生肝癌的風險。