[發(fā)明專利]乳腺良惡性腫瘤血清特異蛋白及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810070666.9
• 申請日: 2008-02-28
• 公開（公告）號: CN101354393A
• 公開（公告）日: 2009-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 應(yīng)敏剛;陳強;葉韻斌;陳慧菁;陳夏;鄭弘宇;吳凡
• 申請（專利權(quán)）人: 福建省腫瘤醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/49
• 分類號: G01N33/49;G01N27/64
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及了一種新的腫瘤標(biāo)志物-乳腺腫瘤早期血清特異蛋白，可在體外檢測區(qū)分乳腺良性病變與乳腺癌的發(fā)生。

背景技術(shù)

乳腺癌(mammary?carcinoma)是乳房腺上皮細胞在多種致癌因子作用下，發(fā)生了基因突變，致使細胞增生失控。乳腺癌是人類最常見的一種惡性腫瘤，也是女性主要惡性腫瘤之一。各國因地理環(huán)境、生活習(xí)慣的不同，乳腺癌的發(fā)病率有很大差異。北美和北歐大多數(shù)國家是女性乳腺癌的高發(fā)區(qū)，南美和南歐一些國家為中等，而亞洲、拉丁美洲和非洲的大部分地區(qū)為低發(fā)區(qū)。據(jù)美國癌癥協(xié)會估計，美國每年有12萬乳腺癌新發(fā)病例，發(fā)病率為72.2/10萬，1976年死于乳腺癌的人數(shù)為33000。乳腺癌在我國各地區(qū)的發(fā)病率也不相同，在世界上我國雖屬女性乳腺癌的低發(fā)國，但近年來乳腺癌的發(fā)病率明顯增高，尤其滬、京、津及沿海地區(qū)是我國乳腺癌的高發(fā)地區(qū)。以上海最高，1972年上海的乳腺癌發(fā)病率為20.1/10萬，1988年則為28/10萬，居女性惡性腫瘤中的第二位。其癥狀主要表現(xiàn)為腫塊、疼痛、乳頭溢液、乳房皮膚與外形改變等。

乳腺良性疾病通常包括纖維囊性乳腺疾病(乳腺纖維瘤、乳腺囊性增生病)、多乳瘤病、乳腺大導(dǎo)管乳頭狀瘤、脂肪瘤、乳房平滑肌瘤、慢性乳腺炎、乳房發(fā)育失常、囊腫等，其絕大部分不會發(fā)生癌變成為惡性腫瘤即乳腺癌，基于乳房對于女性的重要意義，沒有必要一發(fā)現(xiàn)就手術(shù)切除。然而這些乳腺良性腫瘤的癥狀卻與惡性腫瘤相似，因此在良、惡性腫瘤的臨床診斷上出現(xiàn)困難，醫(yī)生為前來就診訴說有腫塊的患者所做的最重要的事就是確定腫塊是不是癌。如果能找到一種方法對乳腺腫塊進行快速高效的檢測，用以區(qū)分良、惡性腫瘤，不儀可以大大降低治療費用，而且可以避免患者出現(xiàn)不必要的心理壓力。現(xiàn)有的區(qū)分乳腺良惡性腫瘤的標(biāo)志物有CA153等，但其靈敏度和特異性遠達不到要求。

蛋白質(zhì)是生命活動的最終執(zhí)行者，腫瘤細胞基因的改變最終也都會反映在蛋白質(zhì)的改變上，因此在腫瘤細胞的發(fā)生、發(fā)展以及侵襲轉(zhuǎn)移過程中必定伴隨著蛋白質(zhì)種類與數(shù)量的改變，并且這些蛋白質(zhì)有可能釋放入血。從理論上講，通過檢測血清中蛋白質(zhì)的動態(tài)變化就有可能篩查出與腫瘤相關(guān)的蛋白質(zhì)，作為疾病早期的指標(biāo)對腫瘤發(fā)生的危險性進行早期評估。近幾年來，蛋白質(zhì)組學(xué)的快速發(fā)展使我們從血清中尋找腫瘤特異相關(guān)蛋白質(zhì)成為可能，尤其是質(zhì)譜技術(shù)的產(chǎn)生，憑借其高靈敏度、高通量、快速簡便等優(yōu)點，已經(jīng)成為微量蛋白質(zhì)檢測的最重要手段之一。

SELDI-TOF-MS即蛋白質(zhì)芯片和質(zhì)譜技術(shù)相結(jié)合的表面增強激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜儀技術(shù)，該技術(shù)中的蛋白質(zhì)芯片具有高度并行性、高通量、微型化和自動化等其他方法難以比擬的優(yōu)越性，同時該芯片采用光敏染料標(biāo)記，靈敏度高，準(zhǔn)確性好，使篩選低豐度小分子蛋白質(zhì)甚至肽成為現(xiàn)實，彌補了傳統(tǒng)方法如色譜、光譜、凝膠電泳等技術(shù)的不足，對篩選和鑒定新的腫瘤相關(guān)特異性標(biāo)志物產(chǎn)生了巨大的影響。同時，該質(zhì)譜技術(shù)可以直接對血清樣品進行鑒定，方便快速，半天即可得出結(jié)果，提供了臨床應(yīng)用的價值。

從包括中國專利在內(nèi)的有關(guān)資料檢索表明，自2001年以來，應(yīng)用SELDI技術(shù)對血清樣品進行檢測來尋找新的腫瘤標(biāo)志物用于腫瘤的早期診斷，成為了腫瘤研究的熱點之一。美國的多家蛋白質(zhì)組學(xué)研究機構(gòu)已用該技術(shù)分別對卵巢癌、前列腺癌等體液樣本進行了研究，發(fā)現(xiàn)了新的標(biāo)志物，其特異性和靈敏度均優(yōu)于現(xiàn)有的檢測方法。國內(nèi)也應(yīng)用該技術(shù)對肺癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、肝癌等部分腫瘤進行了研究，得到了一些腫瘤標(biāo)志物，取得了一些成果和專利。如專利申請?zhí)枮?00410053632.0，200410066304.4，200510080787.8等。但目前尚未有對乳腺良惡性腫瘤進行區(qū)分的研究，因此應(yīng)用質(zhì)譜技術(shù)對乳腺良惡性腫瘤患者血清進行分析來獲得特異的腫瘤標(biāo)志物，具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是建立一套有效的方法，用于在分離的血清中體外檢測區(qū)分乳腺良惡性腫瘤。即應(yīng)用SELDI-TOF-MS技術(shù)，通過建立乳腺良性腫瘤患者與乳腺癌患者之間血清蛋白質(zhì)的指紋圖譜，并進行差異分析，尋找新的差異蛋白質(zhì)標(biāo)志物，從而對乳腺的良、惡性腫瘤進行區(qū)分。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：本發(fā)明提供了一種從分離的外周血血清中體外檢測乳腺疾病的患者發(fā)生危險性的方法，該方法包括下列步驟：

(a)制備乳腺癌患者的血清樣本；

(b)利用表面增強激光解吸電離飛行質(zhì)譜技術(shù)(SELDI-TOF-MS)檢測血清樣品，獲得血清蛋白質(zhì)譜；