[發(fā)明專利]擬莖點菌素化合物及其制備方法和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810070627.9
• 申請日: 2008-02-04
• 公開（公告）號: CN101235040A
• 公開（公告）日: 2008-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭忠輝;杜希萍;沈月毛;黃耀堅;宋思揚(yáng);蘇文金
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué)
• 主分類號: C07D493/04
• 分類號: C07D493/04;A61K31/336;A61P31/04;C12P17/08;C12R1/645
• 代理公司: 廈門南強(qiáng)之路專利事務(wù)所
• 代理人: 馬應(yīng)森

1.擬莖點菌素化合物，其特征在于所用的海藻真菌為擬莖點屬hzla01-1(Phomopsis?sp.hzla01-1)，已于2007年11月22日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC中國武漢大學(xué))，保藏號為CCTCC?NO：M?207184，所述的擬莖點菌素化合物是從海藻真菌擬莖點屬hzla01-1(Phomopsis?sp.hzla01-1)的發(fā)酵產(chǎn)物中得到的兩種結(jié)構(gòu)類似的新化合物，兩種新化合物分別為擬莖點菌素化合物A，(6Z，8E)-3-propyl-4，11-dioxa-bicyclo[8.1.0]undeca-6，8-dien-5-one和擬莖點菌素化合物B，(E)-7-hydroxy-3-propyl-4，11-dioxa-bicyclo[8.1.0]undec-8-en-5-one；

擬莖點菌素化合物A和擬莖點菌素化合物B的結(jié)構(gòu)式分別為：

擬莖點菌素化合物A為無色油狀物，HR?ESI-Q-TOF?m/z?209.1235[M+H]⁺，417.2404[2M+H]⁺(calcd?for?C₁₂H₁₆O₃)；

擬莖點菌素化合物B為無色針狀晶體，HR?ESI-Q-TOF?m/z?227.1435[M+H]⁺，453.2758[2M+H]⁺(calcd?for?C₁₂H₁₈O₄)。

2.如權(quán)利要求1所述的擬莖點菌素化合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)擬莖點屬hzla01-1(Phomopsis?sp.hzla01-1)的種子培養(yǎng)：

a.菌株的斜面培養(yǎng)：馬鈴薯去皮、切成小塊，加水煮沸，紗布過濾，得馬鈴薯濾液，馬鈴薯濾液中加葡萄糖和瓊脂，海水定容，滅菌，得斜面培養(yǎng)基；將斜面培養(yǎng)基制成試管斜面，挑取擬莖點屬hzla01-1菌種接入斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)得斜面菌種；

b.菌株的種子培養(yǎng)：采用與步驟1)a相同的方法制得馬鈴薯濾液，在馬鈴薯濾液中加葡萄糖和瓊脂，滅菌，得種子培養(yǎng)基；將種子培養(yǎng)基倒平板，冷卻后，將上述培養(yǎng)的斜面菌種轉(zhuǎn)接到種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后得種子平板；

2)擬莖點屬hzla01-1(Phomopsis?sp.hzla01-1)的發(fā)酵培養(yǎng)：

采用與步驟1)a相同的方法制得馬鈴薯濾液，在馬鈴薯濾液中加葡萄糖和瓊脂，海水定容，滅菌，得發(fā)酵培養(yǎng)基；將發(fā)酵培養(yǎng)基倒平板；冷卻后，將上述種子平板轉(zhuǎn)接到發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵后得發(fā)酵物；

3)擬莖點菌素化合物的提取

將發(fā)酵物切成小塊，用混合有機(jī)溶劑浸提，合并提取液，減壓濃縮至干，甲醇溶解過濾，濾液減壓濃縮至干，加入少量水，再用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相減壓濃縮得到浸膏；

4)擬莖點菌素化合物的精制

浸膏用中壓液相柱層析，甲醇/水梯度洗脫得到組分1和組分2；組分1用兩次硅膠柱層析，有機(jī)溶劑洗脫，得到擬莖點菌素化合物A；組分2用凝膠柱層析，有機(jī)溶劑洗脫，所得組分用正相硅膠柱和反相硅膠柱層析，得到擬莖點菌素化合物B。

3.如權(quán)利要求2所述的擬莖點菌素化合物的制備方法，其特征在于在步驟1)a中，加水煮沸的時間為30min，所得馬鈴薯濾液中所加的葡萄糖與馬鈴薯的質(zhì)量比為10∶1，所加的瓊脂與馬鈴薯的質(zhì)量比為10∶1。

4.如權(quán)利要求2所述的擬莖點菌素化合物的制備方法，其特征在于在步驟1)a中，海水定容采用海水與自來水混合定容，海水占混合水的總體積為10％～100％，培養(yǎng)斜面菌種是在23～30℃培養(yǎng)3～7d。

5.如權(quán)利要求2所述的擬莖點菌素化合物的制備方法，其特征在于在步驟1)b中，在每升馬鈴薯濾液中加10～30g葡萄糖和10～30g瓊脂，海水定容采用海水與自來水的混合水定容，其中海水占混合水的總體積為10％～100％，在23～30℃培養(yǎng)3～7d得種子平板。

6.如權(quán)利要求2所述的擬莖點菌素化合物的制備方法，其特征在于在步驟2)中，加水煮沸的時間為30min，在每升馬鈴薯濾液中加10～30g葡萄糖和10～30g瓊脂，海水定容采用海水與自來水的混合水定容，其中海水占混合水的總體積為10％～100％，發(fā)酵在23～30℃培養(yǎng)10～18d。