[發(fā)明專利]藥用植物多糖的純化方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810070499.8
• 申請日: 2008-01-21
• 公開（公告）號: CN101215336A
• 公開（公告）日: 2008-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王金亮;宋洪波
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715
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技術(shù)領(lǐng)域????本發(fā)明涉及一種多糖的純化方法，特別是藥用植物多糖的純化方法。

背景技術(shù)????多糖又稱多聚糖，是由單糖縮合成的多聚物，它是生物體內(nèi)除蛋白質(zhì)和核酸以外的又一類重要的信息分子。研究表明多糖具有多種生物功能，如：增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、抗腫瘤、抗病毒、降血糖等，因此對多糖的研究愈來愈引起國內(nèi)外生物學(xué)家、化學(xué)家和藥理學(xué)家的興趣，有關(guān)專家預(yù)言“21世紀(jì)將是多糖的時代”。

目前，多糖的研究范圍涉及提取、分離、純化、相對分子質(zhì)量確定、結(jié)構(gòu)分析、構(gòu)效關(guān)系等多個方面。多糖的純化是對多糖進(jìn)行研究和分析的基礎(chǔ)，文獻(xiàn)報道中多糖的純化大部分只涉及到脂類物質(zhì)的脫除、蛋白的脫除、色素的脫除以及其他一些小分子物質(zhì)的分離，而對核酸的脫除并未涉及到。另外，文獻(xiàn)報道中的雜蛋白的脫除方法為Sevage法、三氟三氯乙烷法或三氯醋酸法，以Sevage法最多。用以上方法脫除蛋白質(zhì)往往存在著蛋白質(zhì)脫除不徹底的現(xiàn)象。本發(fā)明的藥用植物多糖的純化方法是在提取出粗多糖的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，在以往的純化方法中添加了除核酸這一步驟，同時改進(jìn)了雜蛋白的脫除方法，采用冷酚抽提法，使得蛋白質(zhì)的脫除率大大提高，純化后的多糖純度進(jìn)一步提高。

發(fā)明內(nèi)容????本發(fā)明的目的是提供一種藥用植物多糖新的純化方法。

本發(fā)明的藥用植物多糖的純化方法包括提取粗多糖、去除核酸、去除脂類、脫除蛋白和柱層析分離，具體方法包括以下步驟：

1、提取粗多糖：取藥用植物中多糖含量高的組織，如蘆薈葉、人參的塊莖、枸杞的果實……，粉碎后加5～20倍(重量)的水，常溫浸提不少于72h；5000rpm離心后取上清液濃縮1～5倍，添加乙醇使乙醇的終濃度為55％～85％，然后8000rpm離心分離沉淀，烘干后得粗多糖；

2、去除核酸：取粗多糖，用蒸餾水溶解，使其濃度為1～10g/L；添加CaCl₂調(diào)整離子強(qiáng)度，使Ca²⁺濃度為0.1～2mol/L；然后用乙醇沉淀核酸，乙醇終濃度為10％～40％(v/v)，4～9℃靜置時間不少于4h，然后以5000～10000rpm的轉(zhuǎn)速離心脫除核酸沉淀，回收上清液；

3、去除脂類：向脫除核酸后的離心上清液中添加乙醇使乙醇的終濃度為55％～85％(v/v)，4～9℃靜置，時間不少于12h，以5000～10000rpm的轉(zhuǎn)速離心，回收的沉淀為去核酸多糖；將去核酸的多糖分別用乙醇、丙酮和乙醚洗滌2～3次，以洗掉脂質(zhì)，并于室溫下?lián)]發(fā)去掉乙醚，得脫脂粗多糖；

4、脫除蛋白：采用冷酚抽提法脫除蛋白，將脫脂粗多糖用0.1～1mol/L的醋酸鈉溶液溶解，使脫脂粗多糖的濃度為5～10mg/L；然后添加2～3倍(v/v)的冷酚溶液抽提蛋白，震蕩不少于30min；震蕩完畢后用8000～12000rpm的轉(zhuǎn)速離心，回收上清液；最好將此回收的上清液按上述方法連續(xù)抽提蛋白3次；然后移入透析袋中用雙蒸水透析不少于72h，透析溫度為4～9℃；然后向透析液中添加乙醇沉淀多糖，使乙醇終濃度為55％～85％(v/v)，4～9℃靜置不少于12h；再以5000～10000rpm的轉(zhuǎn)速離心分離多糖沉淀；將多糖沉淀分別用乙醇、丙酮和乙醚洗2～3次后，在室溫下?lián)]發(fā)掉乙醚，即得精多糖；

5、柱層析分離：采用柱層析梯度分離，收集精多糖的單峰洗脫液；先用截留分子量為5KD～10KD的膜包濃縮10倍，然后再次醇沉，離心收集多糖沉淀；多糖沉淀經(jīng)真空冷凍干燥即得純多糖；所采用的檢測器為紫外檢測器；柱子裝料和檢測波長可根據(jù)植物多糖實際情況進(jìn)行選擇。

本發(fā)明所采用的試劑均為分析純。

由于本發(fā)明在純化多糖的方法中增加了除核酸，并采用冷酚抽提法脫除蛋白質(zhì)，使得雜蛋白的脫除率達(dá)90％以上，制得的多糖純度高，為多糖在相對分子質(zhì)量確定、結(jié)構(gòu)分析、構(gòu)效關(guān)系等方面的研究奠定了基礎(chǔ)。

具體實施方式????為了充分公開本發(fā)明植物多糖的純化方法，以下結(jié)合實施例加以說明，但本發(fā)明并不局限于此實施例。

實施例1：人參多糖的純化方法，包括以下步驟：

1、取人參莖粉碎后加10倍的水，常溫浸提72h。以5000rpm的轉(zhuǎn)速離心去掉殘渣。取上清液濃縮2倍，添加無水乙醇使其終濃度為65％，然后以8000rpm的轉(zhuǎn)速離心分離沉淀，沉淀烘干后得人參粗多糖；