[發明專利]檢測人線粒體基因差異性表達的基因芯片

無效

• 申請號: 200810070109.7
• 申請日: 2008-08-13
• 公開（公告）號: CN101440397A
• 公開（公告）日: 2009-05-27
• 發明（設計）人: 胡義德;孫恒文;孫玉蘭;錢海洪
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學第二附屬醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 重慶市前沿專利事務所
• 代理人: 郭 云

1、一種檢測人線粒體基因差異性表達的基因芯片，在氨基硅烷修飾的玻璃基片上點制有檢測包括人線粒體基因編碼的13種mRNA，2種rRNA和9種tRNA基因及核DNA(nDNA)編碼的5種凋亡相關基因轉錄豐度的探針，其特征在于：

所述的13種mRNA是，氧化呼吸鏈酶復合體I的NADH-CoQ還原酶亞單位1(ND1)、NADH-CoQ還原酶亞單位2(ND2)、NADH-CoQ還原酶亞單位3(ND3)、NADH-CoQ還原酶亞單位4(ND4)、NADH-CoQ還原酶亞單位4L(ND4L)、NADH-CoQ還原酶亞單位5(ND5)、NADH-CoQ還原酶亞單位6(ND6)，復合體III的細胞色素b(Cytb)，復合物IV的細胞色素氧化酶亞單位I(Cox?I)、細胞色素氧化酶亞單位II(Cox?II)、細胞色素氧化酶亞單位III(Cox?III)，以及復合物V的ATP酶亞單位6(ATPase6)和ATP酶亞單位8(ATPase8或ND6L)；

所述2種rRNA是，12S核糖體RNA(12SrRNA)、16S核糖體RNA(16SrRNA)；

所述9種tRNA是，mtDNA輕鏈編碼的丙氨酸轉運RNA(tRNA-Ala)、天氡酰胺轉運RNA(tRNA-Asn)、半胱氨酸轉運RNA(tRNA-Cys)、谷氨酸轉運RNA(tRNA-Glu)、絲氨酸轉運RNA(tRNA-Ser)，重鏈編碼的精氨酸轉運RNA(tRNA-Arg)、天冬氨酸轉運RNA(tRNA-Asp)、甘氨酸轉運RNA(tRNA-Gly)、組氨酸轉運RNA(tRNA-His)；

所述核DNA(nDNA)編碼的5種凋亡相關基因包括Bad、Bax、Bcl-2、Bcl2-L1、P53。

2、根據權利要求1所述的檢測人線粒體基因差異性表達的基因芯片，其特征在于：所述氨基硅烷修飾的玻璃基片上還點制有看家基因Actingβ、GAPDH作為陽性內參照，人為書寫長度為69mer寡核苷酸序列的探針為陰性內參照，并選擇Hex(hexa-chloro-6-carboxy?fluorescein)為檢測樣點固定的陽性對照。

3、根據權利要求1所述的檢測人線粒體基因差異性表達的基因芯片，其特征在于分別檢測所述人線粒體基因編碼的13種mRNA轉錄豐度的寡核苷酸探針的序列為：

ND1：ACGCCATAAAACTCTTCACCAAAGAGCCCCTAAAACCCGCCACATCTACCATCACCCTCTACATCACCG；

ND2：ACAATAGCCTCATCATCCCCACCATCATAGCCACCATCACCCTCCTACCTCTACTTCTACCTACGCC；

ND3：AGAAATTGCCCTCCTTTTACCCCTACCATGAGCCCTACAAACAACTAACCTGCCACTAATAGTTATGTC；

ND4：CCGGCGCAGTCATTCTCATAATCGCCCACGGGCTTACATCCTCATTACTATTCTGCCTAGCAAACTCAA；

ND4L：TATTGTGCCTATTGCCATACTAGTCTTTGCCGCCTGCGAAGCAGCGGTGGGCCTAGCCCTACTAGTCTC；

ND5：ACAGGTCAACCTCGCTTCCCCACCCTTACTAACATTAACGAAAATAACCCCACCCTACTAAACCCCATT；

DN6：GTCAGGGGTTGAGGTCTTGGTGAGTGTTTTAGTGGGGTTAGCGATGGAGGTAGGATTCGTCCTGTGGGT；

Cytb：CCTGCCTGATCCTCCAAATCACCACAGGACTATTCCTAGCCATGCACTACTCACCAGACGCCTCAACCG；

Cox?I：AGCATATTTCACCTCCGCTACCATAATCATCGCTATCCCCACCGGCGTCAAAGTATTTAGCTGACTCGC；

Cox?II：CGCCCTCCCATCCCTACGCATCCTTTACATAACAGACGAGGTCAACGATCCCTCCCTTACCATCAAATC；

Cox?III：TCAGCCCTCCTAATGACCTCCGGCCTAGCCATGTGATTTCACTTCCACTCCATAACGCTCCTCATACTA；

ATPase6：TGCAGGCCACCTACTCATGCACCTAATTGGAAGCGCCACCCTAGCAATATCAACCATTAACCTTCCCTC；

ND6L：TTACCCCCATACTCCTTACACTATTCCTCATCACCCAACTAAAAATATTAAACACAAACTACCACCTAC。