[發明專利]植物基因作為番茄轉化安全標記基因的方法及應用

無效

• 申請號: 200810069713.8
• 申請日: 2008-05-22
• 公開（公告）號: CN101285101A
• 公開（公告）日: 2008-10-15
• 發明（設計）人: 李正國;符勇耀;鄧偉;楊迎伍
• 申請（專利權）人: 重慶大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/29;C12N15/82;A01H1/00;A01H5/00
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1一種番茄遺傳轉化篩選標記基因的方法及應用，其特征在于一種采用植物基因作為番茄轉化安全篩選標記的方法及應用。

2根據權利要求1所述一種植物基因作為番茄轉化安全篩選標記基因的方法，其特征在于標記基因是植物起源基因且篩選劑安全無毒，包括以下步驟：

(1)植物基因的克?。?/p>

通過PCR和T-A克隆的方法，將來源于植物的TPS1即海藻糖-6-磷酸酶、SOS1即Na+/H+逆向轉運蛋白、DREB基因克隆后測序，獲得安全標記基因。

(2)表達載體的構建：

將標記基因酶切后連接到含雙35S啟動子且已切除GUS即β-葡甘酸酶、GFP即綠色熒光蛋白等異源基因的植物雙元表達載體pCAMBIA或pGrII-35s-OMEGA上替換抗生素或抗除草劑基因，或將酶切后的標記基因直接連接到雙35S啟動的pJIT載體上，采用電轉化方法轉化農桿菌菌株LBA4404或GV3101。

(3)番茄的遺傳轉化：

采用農桿菌介導的葉盤轉化法轉化番茄，在MS培養基上共培養后，轉入含有不同濃度葡萄糖或氯化鈉的選擇培養基上培養，再通過生根培養基生根直至獲得完整的轉基因番茄植株。

(4)轉基因番茄的鑒定：

通過PCR方法鑒定是否轉化成功。

3根據權利要求2所述植物基因的克隆，其特征在于植物是擬南芥或水稻。

4一種權利要求2所述表達載體的構建方法，其特征在于表達載體切除了抗生素或抗除草劑標記基因及GUS、GFP等外源基因，是一種純植物基因表達載體。

5一種權利要求2所述的表達載體及應用，其特征在于表達載體是pAI-35s-AtTPS1或pAI-35s-OsDREB2A。

6根據權利要求2所述番茄的遺傳轉化，其特征在于葡萄糖的篩選濃度為250-350mM，氯化鈉的篩選濃度為150-200mM。

7一種權利要求2所述獲得的轉基因番茄的應用。