[發(fā)明專利]北冬蟲(chóng)夏草菌絲體中多種有效成分的綜合提取方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200810069244.X | 申請(qǐng)日： | 2008-01-15 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN101229199A | 公開(kāi)（公告）日： | 2008-07-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 毛先兵;劉洪波;朱華李;葉偉 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 重慶和潤(rùn)生物工程有限公司 |
| 主分類號(hào)： | A61K36/068 | 分類號(hào)： | A61K36/068;A61P11/00;A61P35/00;C07J9/00;C08B37/00;C07H1/08 |
| 代理公司： | 重慶市前沿專利事務(wù)所 | 代理人： | 黃珩 |
| 地址： | 401121重慶市北部新區(qū)*** | 國(guó)省代碼： | 重慶;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 冬蟲(chóng)夏草 菌絲體 多種 有效成分 綜合 提取 方法 | ||
1.一種北冬蟲(chóng)夏草菌絲體中多種有效成分的綜合提取方法，其特征是按以下步驟進(jìn)行：
(1)蟲(chóng)草甾醇的提取
提取：向干燥、粉碎后的北冬蟲(chóng)夏草菌絲體中加入有機(jī)溶劑，按每1克菌絲體加入3～40毫升有機(jī)溶劑，30～95℃下提取0.5～5小時(shí)，過(guò)濾，重復(fù)提取1～4次，將每次所得的濾液混合，殘留物備用；其中所述的有機(jī)溶劑是正己烷、正丁烷、環(huán)己烷、丙酮、石油醚中的一種；
濃縮：將濾液在溫度30～95℃、常壓或減壓下濃縮至無(wú)有機(jī)溶劑味，回收有機(jī)溶劑，得濃縮物；
皂化：常溫下每1克濃縮物中加入0.2～5毫升堿性溶液，混勻，靜置0.5～24小時(shí)，除去下層可皂化物，得不皂化液，重復(fù)皂化1～3次，其中所述的堿性溶液是濃度為1％至50％的氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液；
萃取：向不皂化液中加入0.2～10倍體積的有機(jī)溶劑，混勻，靜置0.5～24小時(shí)，分取有機(jī)溶劑層，得萃取液，重復(fù)萃取1～5次，其中所述的有機(jī)溶劑是正己烷、正丁烷、環(huán)己烷、丙酮、石油醚中的一種；
干燥：將萃取液在30～95℃下常壓或減壓濃縮至無(wú)有機(jī)溶劑味，回收有機(jī)溶劑，濃縮物經(jīng)干燥處理后，得蟲(chóng)草甾醇；
(2)蟲(chóng)草多糖的提取
提取：將步驟(1)提取蟲(chóng)草甾醇后的殘留物加水，按每1克殘留物加入3～20毫升水，混勻，50～100℃提取0.5～4小時(shí)，過(guò)濾，得濾液和水提殘留物，重復(fù)提取1～4次；
濃縮：將濾液在50～100℃、減壓或常壓下濃縮至原體積的1/3～1/8，得濃縮液；
第一次醇沉：向濃縮液中加入2～6倍體積的乙醇，置于-15～40℃下0.5～48小時(shí)；
過(guò)濾：將醇沉溶液過(guò)濾，可得濾液和濾餅，濾餅為粗蟲(chóng)草多糖；
除蛋白：將粗蟲(chóng)草多糖溶于0.1～10倍體積水后，再加入0.5～3倍體積的Sevage試劑除蛋白，重復(fù)1～6次；
第二次醇沉：經(jīng)過(guò)除蛋白的粗蟲(chóng)草多糖液中加入2～5倍體積的乙醇，置于-15～40℃下0.5～24小時(shí)；
過(guò)濾：將醇沉溶液過(guò)濾，得濾液和濾餅；
干燥：將濾餅置于25～100℃、減壓或常壓下烘干，得高純度蟲(chóng)草多糖。
(3)蟲(chóng)草素的提取
濃縮：取步驟(2)兩次醇沉后的濾液混合，在40～80℃、常壓或減壓下濃縮至無(wú)乙醇味，得濃縮液；
調(diào)pH：取濃縮液用酸性溶液調(diào)pH至1.5～6.0，其中所述的酸性溶液是濃度為1％至50％的鹽酸或硫酸溶液；
柱層析：選取陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，裝柱，按說(shuō)明書(shū)預(yù)處理樹(shù)脂；將上述pH調(diào)好的濃縮液上陽(yáng)離子交換柱，然后用堿性溶液洗脫，收集堿性溶液洗脫液，其中所述的堿性溶液是0.05～5.0mol/L的氨水；
結(jié)晶：將洗脫液在50～100℃、常壓或減壓下濃縮至干，加熱乙醇溶解，置于-15～25℃中結(jié)晶，收集晶體，置于25～100℃烘干，得高純度蟲(chóng)草素。
2.如權(quán)利要求1所述的北冬蟲(chóng)夏草菌絲體中多種有效成分的綜合提取方法，其中步驟(1)所述的北蟲(chóng)草菌絲體包括液體發(fā)酵菌絲體、固體培養(yǎng)菌絲體、栽培子實(shí)體及子實(shí)體收獲后的下腳料或其混合物。
3.如權(quán)利要求1所述的北冬蟲(chóng)夏草菌絲體中多種有效成分的綜合提取方法，其中步驟(2)除蛋白所用Sevage試劑的組份氯仿與正丁醇的體積比是2～8∶1。
4.如權(quán)利要求3所述的北冬蟲(chóng)夏草菌絲體中多種有效成分的綜合提取方法，其中步驟(2)除蛋白所用Sevage試劑的組份氯仿與正丁醇的體積比是4∶1。
5.如權(quán)利要求1所述的北冬蟲(chóng)夏草菌絲體中多種有效成分的綜合提取方法，其中步驟(3)所述的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂是苯乙烯系強(qiáng)酸性凝膠型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。
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