[發明專利]一種含人BMP重組腺病毒載體及其構建方法

無效

• 申請號: 200810068539.5
• 申請日: 2008-07-16
• 公開（公告）號: CN101319228A
• 公開（公告）日: 2008-12-10
• 發明（設計）人: 王大平;彭亮權;徐小平;任凱;熊建義;陸偉;劉建全;朱偉民;周可;歐陽侃;何春耒
• 申請（專利權）人: 深圳市第二人民醫院
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;C12N15/12;C12N5/10;A61K48/00;A61P19/08
• 代理公司: 北京必浩得專利代理事務所
• 代理人: 關松壽

1.一種重組腺病毒載體，其特征在于：含有人BMP基因。

2.根據權利要求1所述的重組腺病毒載體，其特征還在于：BMP基因是人BMP2。

3.根據權利要求1所述的重組腺病毒載體，其特征還在于：腺病毒載體為E1區和E3區缺失的第二代復制缺陷型病毒。

4.根據權利要求1所述的重組腺病毒載體，其特征還在于：包裝細胞是HEK293。

5.根據權利要求1-4中任意一項所述的重組腺病毒載體，其特征還在于：其滴度為1×10¹¹PFU/ml，能夠強表達BMP基因。

6.根據權利要求1所述的重組腺病毒載體的構建方法，其特征在于：包括用PCR方法擴增BMP目的基因，并插入克隆載體pMD19-T?simplevector中獲得了TS-BMP重組質粒，并進行測序分析；將BMP基因亞克隆到穿梭載體pEC3.1(+)中，構建pEC3.1-BMP穿梭質粒，再將其中的表達盒克隆入pAd/BLOCK-iT^TM-DEST腺病毒載體中，獲得pAd-BMP重組質粒，線性化后轉HEK293細胞進行包裝獲得重組腺病毒Ad-BMP顆粒。

7.根據權利要求6所述的重組腺病毒載體的構建方法，其特征還在于：該構建技術是基于λ噬菌體的位點特異性重組系統(attL×attR→attB×attP)。

8.根據權利要求7所述的重組腺病毒載體的構建方法，其特征還在于：位點特異性重組系統(attL×attR→attB×attP)，是在LR?ClonaseII酶介導下，attL總是與attR發生準確地重組反應，形成包含attB，attP位點的產物質粒。

9.根據權利要求8所述的重組腺病毒載體的構建方法，其特征還在于：LR體外同源重組反應體系，反應條件是在25℃反應1小時。

10.根據權利要求1-5中任意一項所述的重組腺病毒載體，其特征還在于：其應用于轉基因組織工程骨治療骨缺損的應用，用于解決臨床上因骨缺損及骨創傷引起的骨修復問題。