[發(fā)明專利]降鈣素基因相關(guān)肽與鮭魚降鈣素融合多肽

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810064961.3
• 申請(qǐng)日: 2008-07-21
• 公開（公告）號(hào): CN101319012A
• 公開（公告）日: 2008-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 余瓊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 黑龍江大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 單軍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種融合多肽。

背景技術(shù)

降鈣素(calcitonin，CT)可直接抑制破骨細(xì)胞(osteoclasts，OC)增殖，阻止骨溶解，促進(jìn)骨形成，并能迅速減輕因骨質(zhì)疏松而引起的腰錐病疼痛或發(fā)病，是治療骨質(zhì)疏松癥的首選藥物之一。它還可以有效調(diào)節(jié)骨鈣與血鈣之間的平衡，并有鎮(zhèn)痛作用；對(duì)治療高血鈣癥、變形性骨炎、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)以及各種原因引起的骨骼疼痛(如類風(fēng)濕、腫瘤)等有非常明顯的效果，在骨痛病的治療中，降鈣素的鎮(zhèn)痛效果可達(dá)嗎啡的30～50倍。由于降鈣素能抑制胃酸分泌，它可用于治療急性胃潰瘍；由于降鈣素能抑制胰腺激素分泌及抑制酶的釋放，它可用于治療急性胰腺炎；降鈣素對(duì)甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)也有治療作用。降鈣素在慢性多關(guān)節(jié)炎及心血管疾病的治療方面也有一定的潛力。鮭魚降鈣素(salmon?calcitonin，sCT)是天然降鈣素中活性最高的一種，其活性約是人降鈣素的40倍，與人降鈣素具有同源性。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明鮭魚降鈣素作用在人降鈣素受體上，所產(chǎn)生的第二信使cAMP的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于人降鈣素，因此其使用量占臨床用降鈣素的近50％。

降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin?gene-related?peptide，CGRP)是調(diào)節(jié)心血管活動(dòng)的重要神經(jīng)遞質(zhì)之一，是迄今所知的人體最強(qiáng)的舒血管物質(zhì)。降鈣素基因相關(guān)肽擴(kuò)冠狀動(dòng)脈作用比硝酸甘油、硝普鈉強(qiáng)240倍，它是由辣椒素敏感的感覺神經(jīng)末梢釋放的一種生物活性多肽，廣泛分布于神經(jīng)及心血管系統(tǒng)。在心血管系統(tǒng)中，降鈣素基因相關(guān)肽生物活性具有多樣性，如強(qiáng)大的舒血管作用、抑制平滑肌細(xì)胞增殖和內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，也能促進(jìn)細(xì)胞分化增殖，參與血管新生。CGRP的舒張冠狀血管的作用遠(yuǎn)強(qiáng)于P物質(zhì)(substance?P，SP)、心鈉素和去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)；比乙酰膽堿(acetylcholine，Ach)、5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)等強(qiáng)10000倍左右，比異丙腎上腺素強(qiáng)10～100倍。CGRP血管舒張反應(yīng)呈現(xiàn)不同程度的劑效——依賴性，即適當(dāng)加大CGRP的注入劑量時(shí)反應(yīng)增強(qiáng)，濃度低則效應(yīng)緩慢，但持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。Shen等(Shen?YT，Pittman?TJ，Buie?PS.Functional?role?of?alpha-calcitonin?gene-related?peptide?in?theregulation?of?the?cardiovascular?system[J].Pharmacol?Exp?Ther，2001，298(3)：551-558.)認(rèn)為盡管外源性的α-CGRP可以引起不同部位血管床的舒張，但在正常狀態(tài)下的內(nèi)源性α-CGRP對(duì)血管調(diào)節(jié)并不起重要作用。經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證降鈣素基因相關(guān)肽能夠抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞和抑制血管新生，防治高血壓，防止充血性心力衰竭，防治心絞痛，防治心肌梗死和治療休克。而且具有在脊髓水平調(diào)制痛覺的功能，可調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞骨吸收和促進(jìn)成骨細(xì)胞分裂。

目前市場(chǎng)上只有降鈣素產(chǎn)品，而降鈣素基因相關(guān)肽只停留在實(shí)驗(yàn)室研究階段。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了得到一種既含有降鈣素又含有降鈣素基因相關(guān)肽的產(chǎn)品，而提供了一種降鈣素基因相關(guān)肽與鮭魚降鈣素融合多肽。

降鈣素基因相關(guān)肽與鮭魚降鈣素融合多肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示；且降鈣素基因相關(guān)肽與鮭魚降鈣素融合多肽C端酰胺化。

經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證本發(fā)明降鈣素基因相關(guān)肽與鮭魚降鈣素融合多肽保留了降鈣素基因相關(guān)肽和鮭魚降鈣素各自的酶活性；而且偶聯(lián)反應(yīng)產(chǎn)生還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的速度是同時(shí)加入兩種單一(降鈣素基因相關(guān)肽和鮭魚降鈣素)多肽的反應(yīng)體系反應(yīng)速度的兩倍以上，同時(shí)過(guò)渡態(tài)時(shí)間(transienttime)大大縮短，縮短至原過(guò)渡態(tài)時(shí)間的1/4左右。

本發(fā)明為了提高msCT生物活性依據(jù)msCT生物活性對(duì)構(gòu)象依存性的現(xiàn)象從而對(duì)其氨基酸殘基進(jìn)行了改造，將msCT第8位的纈氨酸變?yōu)楦拾彼?、?6位的亮氨酸用丙氨酸置換、再刪除22位的酪氨酸(msCT[Gly⁸，Ala¹⁶，del-Tyr²²])，msCT的生物活性由4500IU/mg提高到8600IU/mg。

本發(fā)明降鈣素基因相關(guān)肽與鮭魚降鈣素融合多肽C端酰胺化可提高降鈣素的活性約30倍(C端酰胺化的本發(fā)明降鈣素基因相關(guān)肽與鮭魚降鈣素融合多肽生物學(xué)活性為4500IU/mg，C端非酰胺化的降鈣素基因相關(guān)肽與鮭魚降鈣素融合多肽生物學(xué)活性為100～200IU/mg)。

具體實(shí)施方式