[發明專利]一種南瓜白粉病菌的保存方法

無效

• 申請號: 200810064736.X
• 申請日: 2008-06-13
• 公開（公告）號: CN101294138A
• 公開（公告）日: 2008-10-29
• 發明（設計）人: 張俊華;崔崇士;劉學敏;劉洋大川
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 哈爾濱市哈科專利事務所有限責任公司
• 代理人: 劉婭

(一)技術領域

本發明涉及一種生物病菌的保存方法，具體涉及一種南瓜白粉病菌的保存方法。

(二)背景技術

南瓜白粉病菌是一種專性寄生菌，其無性世代只能在活體上繁殖保存。傳統的方法是將病菌接種到感病的寄主植物上保存，一般可保存菌種1個月，但是容易污染。特別對于研究白粉病菌的生理小種分化的研究利用這種方法保存菌種會造成病菌的相互污染。因而選擇一種合適的南瓜病菌的保存方法迫在眉睫。

(三)發明內容

本發明的目的在于提供一種能夠使南瓜白粉病菌的保存時間更長，方法更簡便實用的南瓜白粉病菌的保存方法。

本發明的目的是這樣實現的：首先將含有白粉病菌有性世代閉囊殼的南瓜葉，用毛筆將分生孢子刷于盛有清水的容器中，用血球計數板計數配制接種所需濃度的孢子懸浮液，在南瓜苗齡為兩片真葉時，噴霧接種方法接種，待發病后，用水沖去葉片上的雜物和原有的分生孢子和閉囊殼，保濕誘發產生新的閉囊殼，最后用滅菌的毛刷將閉囊殼刷入到保存液中，以滅菌水作對照，放入-26℃環境中保存。

本發明還有這樣一些技術特征：

1、所述的保存液配方為：體積比為10份蔗糖、12份甘油、7份二甲基亞砜、8份脫脂乳加水定容500ml。

為了使南瓜白粉病菌的保存時間更長，方法更簡便實用，以滿足實際研究工作的需要，發明人針對南瓜白粉病菌的保存方法進行研究。同時該方法對于其他植物白粉病菌的保存也具有一定的借鑒和指導意義。本發明的實驗效果為：

南瓜白粉病病原菌用上述保存液在-26℃冰箱中保存二年仍具有很強的活性。而對照用無菌水保存的南瓜白粉病病原菌沒有活性。

用保存液保存24個月后，用解剖針挑取5-10個子囊孢子制成水質玻片，用指尖輕壓蓋玻片，將子囊從子囊殼中擠出，在顯微鏡下可以看到閉囊殼組織保存較好，能清晰的看到閉囊殼壁細胞，顯微鏡視野較清晰，有少量的閉囊殼組織破損的殘渣；42小時后，子囊孢子的釋放量達到最高值。當子囊孢子釋放量達到最大時，將子囊孢子懸浮液用膠頭滴管滴在南瓜葉片上接種，接種12株南瓜，每株1片葉，接種后的南瓜每株分別放在塑料薄膜內保濕，并用一層遮陽網遮蔭，結果12株植株100％發病。而對照用滅菌水保存的南瓜白粉病菌在顯微鏡下可以看到閉囊殼組織破損嚴重，閉囊殼壁的組織大塊堆積，不容易觀察到閉囊殼壁上的細胞，顯微鏡視野混濁，充滿大量的閉囊殼組織殘渣。子囊不能釋放子囊孢子，用同樣的方法接種12株南瓜，結果均未發病。

(四)具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明：

本實施例首先將在南瓜田采集的含有白粉病菌有性世代閉囊殼的南瓜葉，用毛筆將分生孢子刷于盛有清水的燒杯中，用血球計數板計數配制接種所需濃度的孢子懸浮液。在南瓜苗齡為兩片真葉時，噴霧接種方法接種，待發病后，用水沖去葉片上的雜物和原有的分生孢子和閉囊殼，保濕誘發產生新的閉囊殼。用滅菌的毛刷將閉囊殼刷入到保存液中，以滅菌水做對照，放入-26℃冰箱中保存。本實施例中保存液配方如下：體積比為10％蔗糖、12％甘油、7％二甲基亞砜、8％脫脂乳加水定容500ml。