[發(fā)明專利]聚乙二醇單修飾的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810062516.3
• 申請日: 2008-06-13
• 公開（公告）號: CN101602801A
• 公開（公告）日: 2009-12-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 金榮;徐飛虎;王同映;劉曉妮;王昌梅;單劍峰;朱琳;方井晉;汪軍遠(yuǎn);戎亞雯
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州九源基因工程有限公司
• 主分類號: C07K14/535
• 分類號: C07K14/535;C07K1/107;A61K38/19;A61P7/00
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 徐關(guān)壽

1、一種聚乙二醇單修飾的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體，其特征在于：(1)所述的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體氨基酸序列與Seq?ID?No.1-SeqID?No.21任一項所示的氨基酸序列相同；

(2)所述的聚乙二醇為帶有氨基反應(yīng)基團(tuán)的聚乙二醇分子，其定點(diǎn)結(jié)合于重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體蛋白序列中的α-氨基或ε-氨基。

2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的聚乙二醇單修飾的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體，其特征在于：所述的聚乙二醇分子為PEG琥珀酰亞胺碳酸酯、PEG對硝基苯碳酸酯、PEG琥珀酰亞胺琥珀酸酯、PEG碳酰咪唑、PEG苯并三唑碳酸酯(BTC-PEG)、PEG苯基琥珀酰亞胺碳酸酯、甲氧聚乙二醇羥琥珀酰酯乙酸酯(mPEG-succinimidylcarbonate，mPEG-SC)、甲氧聚乙二醇醛或?qū)蓚€線性的BTC-PEG或mPEG-SC鏈連到賴氨酸的α-氨基和ε-氨基形成的分支狀的PEG衍生物等。

3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的聚乙二醇單修飾的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體，其特征在于：

(1)所述的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體氨基酸序列與Seq?ID?No.7所示的氨基酸序列相同；

(2)所述的聚乙二醇為甲氧聚乙二醇丙醛，其與重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體蛋白序列中N末端甲硫氨酸殘基上的α-氨基反應(yīng)后形成胺鍵相連。

4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的聚乙二醇單修飾的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體，其特征在于：

(1)所述的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體氨基酸序列與Seq?ID?No.7所示的氨基酸序列相同；

(2)所述的聚乙二醇為甲氧聚乙二醇丙醛，其與重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體蛋白序列中第35位賴氨酸殘基上的ε-氨基反應(yīng)后形成胺鍵相連。

5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的聚乙二醇單修飾的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體，其特征在于：

(1)所述的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體氨基酸序列與Seq?ID?No.7所示的氨基酸序列相同；

(2)所述的聚乙二醇為甲氧聚乙二醇丙醛，其與重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體蛋白序列中第41位賴氨酸殘基上的ε-氨基反應(yīng)后形成胺鍵相連。

6、權(quán)利要求1-5中任一項所述的聚乙二醇單修飾的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體在制備治療因放療、化療等引起的中性粒細(xì)胞減少癥藥物中的應(yīng)用。

7、一種含有如權(quán)利要求1所述的聚乙二醇單修飾的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體的生物制品，其特征在于：所述制品含有至少90％以上的聚乙二醇單修飾的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體和至多10％的未發(fā)生聚乙二醇化的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體。

8、一種制備如權(quán)利要求1所述的聚乙二醇單修飾的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體的方法，其包括如下步驟：

(1)在含水介質(zhì)中，帶有氨基反應(yīng)基團(tuán)的聚乙二醇分子與重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體(rmhG-CSF)中的氨基反應(yīng)；

(2)任選地從反應(yīng)混合物中分離聚乙二醇單修飾的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體(rmhG-CSF)的產(chǎn)物。

9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于：重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體∶聚乙二醇分子的比例在1∶1-1∶20之間。

10、重組人粒細(xì)胞集落刺激因子突變體，其氨基酸序列與Seq?ID?No.1-Seq?IDNo.21任一項所示的氨基酸序列相同。