[發明專利]重組金黃色葡萄球菌腸毒素Q口服制劑及應用

無效

• 申請號: 200810062476.2
• 申請日: 2008-06-12
• 公開（公告）號: CN101293095A
• 公開（公告）日: 2008-10-29
• 發明（設計）人: 陳樞青;丁丁
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61K39/085
• 分類號: A61K39/085;C12N15/31;C12N15/70;C07K14/31;A61P35/00;A61P37/04
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司
• 代理人: 張法高;趙杭麗

1.一種重組金黃色葡萄球菌腸毒素Q口服制劑，所述重組金黃色葡萄球菌腸毒素Q屬于超抗原蛋白，其特征是：SEQ?ID?NO.1是該重組金黃色葡萄球菌腸毒素Q的氨基酸序列，表達該重組金黃色葡萄球菌腸毒素Q的是重組質粒pGEX-4T-1-SEQ，該質粒由pGEX-4T-1和SEQ?ID?NO.2的核苷酸序列經過重組構建而成，該口服制劑還含有制劑允許的藥物賦形劑或載體。

2.根據權利要求1所述的重組金黃色葡萄球菌腸毒素Q口服制劑，其特征是所述重組金黃色葡萄球菌腸毒素Q通過以下步驟獲得：

(1)設計分別帶有BamH?I和Xho?I酶切位點的用于克隆金黃色葡萄球菌腸毒素Q成熟肽序列的上下游引物：

SEQ?ID?NO.3：gca?gga?tcc?gat?agg?aaa?aat?g，劃線部分為BamH?I酶切位點，

SEQ?ID?NO.4：cgc?ctc?gag?cta?cag?aac?caa?a，劃線部分為Xho?I酶切位點，

(2)以金黃色葡萄球菌基因組為模板，采用PCR擴增獲得編碼金葡菌腸毒素Q蛋白成熟肽的基因片段，分別將其連入pGEM-T質粒載體上的多克隆位點，構建pGEM-T-SEQ重組質粒，通過測序證實具有SEQ?ID?NO.2的序列的基因片段與GenBank數據庫中的編碼相同蛋白質的基因序列完全一致；

(3)以pGEM-T-SEQ質粒為模板，PCR擴增獲得兩端帶有酶切位點的編碼金葡菌腸毒素Q蛋白成熟肽的基因序列，將上述基因片段用內切酶BamH?I和Xho?I進行酶切后與用相同內切酶處理后的pGEX-4T-1質粒相連接，構建表達質粒pGEX-4T-1-SEQ；

(4)將pGEX-4T-1-SEQ表達質粒轉化至大腸桿菌BL21，誘導表達帶GST標簽的重組GST-SEQ融合蛋白。收獲菌體并破碎后離心收集上清，依次采用親和層析、離子層析、凝膠層析獲得高純度的重組金葡菌腸毒素Q。

3.根據權利要求1所述的重組金黃色葡萄球菌腸毒素Q口服制劑，其特征是：所述藥物的給藥方式選用口服給藥、胃腸道給藥或非胃腸道外給藥。

4.根據權利要求1所述的重組金黃色葡萄球菌腸毒素Q口服制劑，其特征是：該口服制劑含有的藥物賦形劑或載體包括防止或抑制腸糜蛋白酶蛋白水解活性的成分、防止或抑制腸胰蛋白酶蛋白水解活性的成分、防止或抑制胃蛋白酶蛋白水解活性的成分、吸收促進劑和生物制品中可接受的組分和輔料。

5.根據權利要求1所述的重組金黃色葡萄球菌腸毒素Q口服制劑在制備治療惡性腫瘤以及其他嚴重并發癥藥物中的應用。