[發(fā)明專利]那西肽制劑含量的檢測(cè)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810062416.0
• 申請(qǐng)日: 2008-06-06
• 公開（公告）號(hào): CN101299010A
• 公開（公告）日: 2008-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁瑜;曹春華;陳貴才
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江匯能動(dòng)物藥品有限公司
• 主分類號(hào): G01N1/38
• 分類號(hào): G01N1/38
• 代理公司: 杭州中成專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 馮子玲

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種飼料藥物添加劑及其各種制劑的含量檢測(cè)的改進(jìn)方法，具體涉及含硫多肽類抗生素那西肽在稀釋過程中的保護(hù)方法。

背景技術(shù)

飼料安全是綠色環(huán)保食品的基本點(diǎn)，我國(guó)幅員遼闊，人口眾多，隨著改革開放的步伐加快，人民生活水平提高，畜禽水產(chǎn)的需求量也日益增多。另外我國(guó)是一個(gè)農(nóng)業(yè)大國(guó)，禽畜產(chǎn)品出口量很大，但藥物殘留問題很嚴(yán)重，因此研究和開發(fā)綠色飼料添加劑對(duì)保障人民身體健康和發(fā)展我國(guó)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)十分必要。2001年7月農(nóng)業(yè)部頒發(fā)了《飼料藥物添加劑使用規(guī)范》的通知，并列出了33種符合規(guī)范的飼料藥物添加劑，那西肽是其中之一。新獸藥那西肽(又名諾西肽，英文名Nosiheptide)是生物工程的產(chǎn)物，由Streptomyces?actuosus發(fā)酵產(chǎn)生，是一種新型非吸收型的飼用抗生素。其中的有效成分含硫多膚類抗生素那西肽，結(jié)構(gòu)為12種氨基酸及衍生物形成的多肽物質(zhì)，分子量為1222，分子式為C₅₁H₄₃N₁₃O₁₂S₆，結(jié)構(gòu)式(Merck?index，fourth?edtion)參見結(jié)構(gòu)式1。那西肽純品是一種黃色結(jié)晶，為一種脂溶性產(chǎn)物，極難溶于非脂溶性或弱脂溶性體系中。

結(jié)構(gòu)式1：

那西肽作為飼料用添加劑具有以下特點(diǎn)：1、動(dòng)物專用抗生素，不引起交叉耐藥。2、在動(dòng)物體內(nèi)不殘留，不污染食品。3、添加量少，2.5-10ppm，促生長(zhǎng)效果明顯，提高增重8-10％，并提高飼料報(bào)酬。4、應(yīng)用范圍廣，可用于畜、禽、魚等。

那西肽是國(guó)外1961年發(fā)現(xiàn)的化合物，70年代法國(guó)朗普洛克公司曾對(duì)其進(jìn)行研究，80年代未由日本三菱公司開發(fā)成新型非吸收型的飼用抗生素，并于1987年12月25日被日本政府批準(zhǔn)為法定的飼料添加劑，列入了日本飼料安全法，其商品名為PrilnofaX(Hess&Clark)。由于其在體內(nèi)不殘留的性質(zhì)，目前被歐共體、北美、日本等國(guó)廣泛使用

1988年上海醫(yī)科大學(xué)對(duì)那西肽進(jìn)行開發(fā)研究，1998年6月獲農(nóng)業(yè)部頒發(fā)那西肽新獸藥證書(三類)(原料藥和預(yù)混劑)。并經(jīng)中國(guó)獸藥監(jiān)察所對(duì)那西肽樣品的測(cè)試鑒定，產(chǎn)品質(zhì)量與國(guó)外同類產(chǎn)品完全一致。2002年，杭州匯能生物技術(shù)公司與復(fù)旦大學(xué)合作將那西肽產(chǎn)業(yè)化，商品名為“諾農(nóng)”。在禽、畜和水產(chǎn)上廣泛應(yīng)用，獲得良好的社會(huì)效益。

由于那西肽的結(jié)構(gòu)性質(zhì)決定了其為脂溶性物質(zhì)，在非脂溶性溶液體系中溶解性差而且不穩(wěn)定，如果用非脂溶性或弱脂溶性體系進(jìn)行處理時(shí)，會(huì)發(fā)生溶解不完全、溶液中不穩(wěn)定或稀釋時(shí)不能完全定量轉(zhuǎn)移等問題。

現(xiàn)行規(guī)定的那西肽制劑含量測(cè)定方法(抗生素微生物檢定法)中，其制劑液的稀釋制備，所用的是脂溶性很差的混合稀釋液，因此在該方法操作過程中會(huì)產(chǎn)生測(cè)試結(jié)果的較大偏差和重復(fù)性不好的情況。必須進(jìn)行有效改進(jìn)后，測(cè)定的準(zhǔn)確性精密性才會(huì)得到保障。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)行的那西肽制劑含量測(cè)定方法(抗生素微生物檢定法)中所用的稀釋液脂溶性差，檢測(cè)過程中會(huì)產(chǎn)生測(cè)試結(jié)果的較大偏差和重復(fù)性不好的情況，提供一種改進(jìn)的檢測(cè)方法，使測(cè)定的準(zhǔn)確性得到保障。

本發(fā)明那西肽制劑含量檢測(cè)改進(jìn)法是：在那西肽制劑提取液用弱脂溶性溶液稀釋前，預(yù)先加入有機(jī)溶劑對(duì)其穩(wěn)定性進(jìn)行保護(hù)。

用于預(yù)先加入的有機(jī)溶劑是指對(duì)那西肽有相當(dāng)脂溶性的有機(jī)溶劑系列，這些有機(jī)溶劑是指N，N-二甲基甲酰胺(N，N-dimethylformamide?DMF)、二甲基亞砜、丙酮、氯仿、甲醇、乙醇其一。

用于預(yù)先加入的對(duì)其穩(wěn)定性進(jìn)行保護(hù)的脂溶性有機(jī)溶劑優(yōu)選為N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。

本發(fā)明設(shè)計(jì)利用預(yù)先添加有機(jī)溶劑來保護(hù)那西肽的溶出及后處理中的穩(wěn)定性，以使得能夠被定量且穩(wěn)定地轉(zhuǎn)移到非脂溶性稀釋液中，從而使得含量能被準(zhǔn)確測(cè)定，并且明顯改進(jìn)方法的重復(fù)性。

本發(fā)明以DMF為例來說明保護(hù)那西肽的效果。

本發(fā)明涉及的檢測(cè)方法主要步驟如下：

1)待測(cè)液的制備：按照中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)2003版》中那西肽項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。

2)其它測(cè)試用試液的制備：按照中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)2003版》中那西肽項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。