[發明專利]一種螺旋藻藻膽蛋白α亞基全蛋白基因及其編碼蛋白無效
| 申請號： | 200810061424.3 | 申請日： | 2008-05-13 |
| 公開（公告）號： | CN101358194A | 公開（公告）日： | 2009-02-04 |
| 發明（設計）人： | 于平;勵建榮;陸偉宏;唐云平 | 申請（專利權）人： | 浙江工商大學 |
| 主分類號： | C12N15/31 | 分類號： | C12N15/31;C07K14/405;C12N15/63;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通專利事務所有限公司 | 代理人： | 徐關壽 |
| 地址： | 310035*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 螺旋藻 蛋白 亞基全 基因 及其 編碼 | ||
1.一種螺旋藻藻膽蛋白α亞基全蛋白表達載體的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
(a)獲得螺旋藻藻膽蛋白α亞基質粒：從新鮮藻泥中提取螺旋藻基因組DNA，以其為模板，用PCR擴增出螺旋藻藻膽蛋白α亞基基因的核苷酸序列；將該基因連接到pMD19-T?Simple?Vector上，將其轉化到大腸桿菌DH5α，提取質粒pMD19-cpcA，經BamHI和SacI酶切得到脫輔基藻膽蛋白α亞基基因，與經同樣雙酶切的表達質粒pETDuet-1連接得到pETDuet-2；
(b)構建螺旋藻藻膽蛋白α亞基、裂合酶E表達載體：以螺旋藻基因組DNA為模板，用PCR擴增出裂合酶E基因，擴增片斷經SacI和SalI酶切后，將裂合酶E基因連接到經同樣雙酶切的pETDuet-2上，得到表達載體pETDuet-3；
(c)構建螺旋藻藻膽蛋白α亞基、裂合酶E/F表達載體：以螺旋藻基因組DNA為模板，用PCR擴增出裂合酶F基因，擴增片斷經SalI和NotI酶切后，將裂合酶F基因連接到經同樣雙酶切的pETDuet-3上，得到表達載體pETDuet-4；
(d)構建藻膽蛋白α亞基、裂合酶E/F、血紅素氧化酶表達載體：以螺旋藻基因組DNA為模板，用PCR擴增出血紅素氧化酶基因hox1，擴增片斷經NdeI和BglII酶切后，將血紅素氧化酶基因連接到經同樣雙酶切的pETDuet-4上，得到表達載體pETDuet-5；
(e)構建螺旋藻藻膽蛋白α亞基全蛋白表達載體：以螺旋藻基因組DNA為模板，用PCR擴增出藻膽素合成酶基因pcyA，擴增片斷經BglII和KpnI酶切后，將藻膽素合成酶基因連接到經同樣雙酶切的pETDuet-5上，得到表達載體pETDuet-6。
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