[發明專利]梅花參中新的抗腫瘤化合物Ananaside B

無效

• 申請號: 200810061260.4
• 申請日: 2008-03-26
• 公開（公告）號: CN101245091A
• 公開（公告）日: 2008-08-20
• 發明（設計）人: 巫軍
• 申請（專利權）人: 巫軍
• 主分類號: C07J71/00
• 分類號: C07J71/00;C07J75/00;A61K31/58;A61P35/00;A61K35/56
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技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，是一種從海洋動物梅花參中分離到的新的抗腫瘤化合物Ananaside?B。

背景技術

梅花參(Thelenota?ananas?J.)，又名“鳳梨參”，屬海洋棘皮動物門海參綱刺參科。其體形很大，長一般為700mm，寬約100mm，高約80mm，廣泛分布于我國西沙群島和臺灣南端。其體內含有豐富的蛋白質、多糖、維生素、皂苷類物質，具有補肝腎，益精，養血的功效。有關其所含的皂苷類成分的化學結構及抗腫瘤活性迄今尚未見有過報道。

發明內容

本發明是從生長于中國福建海域的梅花參中提取分離一種新的皂苷類化合物，命名為Ananaside?B，其化學結構如下：

Ananaside?B為無色結晶性粉末，溶點203～205℃(MeOH-H₂O)，[α]_D²⁰-12.3°(c＝0.2，MeOH)，Liebermann-Burchard反應和Molisch反應均呈陽性。電噴霧質譜信號m/z?1229[M+Na]⁺和m/z?1183[M-Na]^-。紅外光譜：max-3416，強寬峰(羥基)，1740(羰基)，1637(雙鍵)，1256，1070(υs，磺酸基)。¹H-和¹³C核磁共振數據見表1。

表1?Ananaside?B的的¹H和¹³C核磁共振數據

Xyl：木糖，Qui：奎諾糖，MeGlc：3-氧甲基葡萄糖，J值：偶合常數

本發明還提供了從梅花參提取分離Ananaside?B的方法，其步驟如下：

(1)提取：將梅花參洗凈，切碎，用5倍量(重量)95％乙醇浸泡7天，濾出提取液，再用85％乙醇浸泡提取2次，每次7天，合并3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50％乙醇洗脫。收集50％乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂苷提取物。

(2)分離：將上述總皂苷提取物應用硅膠柱層析，以二氯甲烷∶甲醇∶水為8～5∶1～4∶1混合溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含Ananaside?B的流份，再經C₁₈反相柱層析，以甲醇∶水為9∶1～7∶3梯度洗脫，薄層層析檢測，得Ananaside?B純品。

本發明對Ananaside?B進行了體外抗腫瘤試驗，表明其具有明顯的抑制腫瘤的效果。試驗所用細胞株為國際通用的腫瘤細胞株，即：

A-549(肺癌)

MCF-7(乳腺癌)

IA-9(卵巢癌)

CAKI-1(腎癌)

U-87-MG(神經母細胞癌)

PC-3(前列腺癌)

KB(鼻咽癌)

KB-VIN(鼻咽癌)

SK-MEL-2(黑色素瘤)

HCT-8(腸癌)

試驗方法為國際通用的SRB法：根據細胞生長速率，將處于對數生長期的腫瘤細胞以90μl/孔接種于96孔培養板，貼壁生長24小時再加藥10μl/孔。每個濃度設三復孔。并設相應濃度的生理鹽水溶媒對照及無細胞調零孔。腫瘤細胞在37℃、5％CO₂條件下培養72小時，然后傾去培養液，用10％冷TCA固定細胞，4℃放置1小時后用蒸餾水洗滌5次，空氣干燥。最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶標儀520nm波長下測定OD值。試驗結果見表2。

表2?Ananaside?B對腫瘤細胞的抑制作用

IC₅₀：表示本發明化合物的半數有效抑制濃度

上述實驗結果表明，Ananaside?B對10種不同的腫瘤細胞株均顯示明顯的抑制作用。

本發明為研制新的抗腫瘤藥物提供了新的先導化合物，為開發利用中國的海洋藥用生物資源具有重要意義。

具體實施方式：

以下結合實施例進一步描述Ananaside?B的分離制備。

將梅花參1000克洗凈，切碎，分別用5倍量(重量)的95％、85％、85％乙醇依次浸泡，每次浸泡7天，合并乙醇浸出液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于3倍量水中，過濾，濾液通過DA201-B大孔樹脂柱，依次用水和50％乙醇洗脫，收集50％乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至干，得總皂苷5.6克。將總皂苷進行硅膠柱層析，以二氯甲烷∶甲醇∶水為7∶3∶1的溶劑洗脫，收集含AnanasideB的流份，再經C₁₈反相柱層析，以甲醇∶水為9∶1～7∶3溶劑進行梯度洗脫，薄層層析檢測，得Ananaside?B純品0.6克。