[發(fā)明專(zhuān)利]一種可用作免疫抑制劑的帶有－Ile－Sta－Pro－殘基片段的環(huán)肽及其合成工藝

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810061032.7
• 申請(qǐng)日: 2008-05-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101289499A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李湘;徐琪
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 杭州中肽生化有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K7/64
• 分類(lèi)號(hào): C07K7/64;C07K1/02;C07K1/20;A61P37/06
• 代理公司: 杭州杭誠(chéng)專(zhuān)利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 俞潤(rùn)體

1.一種可用作免疫抑制劑的帶有-Ile-Sta-Pro-殘基片段的環(huán)肽，環(huán)Ile-Ile-Sta-Pro-Tyr-Val-Pro-Leu，其結(jié)構(gòu)式為：

其中Sta的中文名稱(chēng)為(3S，4S)-4-氨基-3-羥基-6-甲基庚酸，分子式為C₈H₁₇NO₃。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的帶有-Ile-Sta-Pro-殘基片段的環(huán)肽，其特征在于為白色粉末，難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑乙醇，DMSO中。

3.一種如權(quán)利要求1或2所述的可用作免疫抑制劑的帶有-Ile-Sta-Pro-殘基片段的環(huán)肽的合成工藝，其特征在于有如下步驟：

1)脫除氨基保護(hù)基：將Boc-Pro-Merrifield?Resin?8.0g用DMF浸泡30min，使之充分溶脹，然后抽干；加入含20％哌啶的DMF溶液20mL，通氮?dú)夥磻?yīng)30min，再抽干；然后用DMF洗滌5次，以除去殘留的脫保護(hù)試劑；茚三酮檢測(cè)，若樹(shù)脂呈深藍(lán)色，則表明Fmoc保護(hù)基已經(jīng)脫除；得到H-Pro⁷-MerrifieldResin；

2)接肽反應(yīng)：在反應(yīng)器中加入溶解有6.6g?Boc-Val-OH的DMF溶液，通氮?dú)鈹嚢鑾追昼姡缓蠹尤際BTU或HATU，最后加入NMM，反應(yīng)30min；得到Boc-Val⁶-Pro⁷-Merrifield?Resin；加入DMF的量以完全浸沒(méi)樹(shù)脂為準(zhǔn)；抽干，用DMF洗滌5次；然后用甲醇洗滌樹(shù)脂，以除去氨基酸溶液和DMF，以便進(jìn)行茚三酮檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果若樹(shù)脂呈現(xiàn)無(wú)色，則說(shuō)明反應(yīng)較為完全；然后再次用含20％哌啶的DMF溶液脫保護(hù)，得到H-Val⁶-Pro⁷-Merrifield?Resin；按肽鏈的氨基酸序列依次繼續(xù)用Boc-Tyr(tBu)-OH、Boc-Pro-OH、Boc-Sta-OH、Boc-Ile-OH、Boc-Ile-OH、Boc-Leu-OH重復(fù)以上接肽反應(yīng)，直至最終合成出所需肽鏈；完整的合成順序?yàn)椋篜ro，Val，Tyr，Pro，Sta，Ile，Ile，Leu；

3)肽鏈的切割：將合成肽鏈用HF液切割，反應(yīng)時(shí)間為3.0h，然后減壓過(guò)濾，收集濾液，用冷乙醚沉淀溶解在切割液中的多肽，8000rpm離心10min，于真空干燥器中干燥12h，得線性肽鏈的粗品，純度56％；粗品經(jīng)硅膠柱純化，粗品純度92％，得率85％；

4)肽鏈的環(huán)化：將線性純化多肽0.5g用200mL?DMF溶解，加入一定量的EDC、HOBt和DIEA，反應(yīng)過(guò)程用離子阱質(zhì)譜儀全程跟蹤直至所有的線性肽都轉(zhuǎn)化成環(huán)狀多肽為止，總時(shí)間約30-40分鐘；蒸干DMF，得環(huán)肽粗品，粗品純度75％。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的環(huán)肽合成工藝，其特征在于所述的肽鏈的環(huán)化步驟后有環(huán)肽粗品的純化步驟：將上述環(huán)化粗品肽溶于適量DMSO中，用高效液相色譜儀進(jìn)行分離純化，色譜柱為C18反相柱，洗脫液：A液為0.1％TFA的水溶液，B液為含0.1％TFA的乙腈水溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm；純化好的液體進(jìn)行凍干得最終環(huán)化多肽244mg，純度95.1％，得率65.2％。