[發明專利]從木鱉子中提取免疫佐劑成分的方法

無效

• 申請號: 200810059353.3
• 申請日: 2008-01-25
• 公開（公告）號: CN101224231A
• 公開（公告）日: 2008-07-23
• 發明（設計）人: 胡松華
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61K36/42
• 分類號: A61K36/42;A61K31/704;A61K39/39;A61P37/04
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司
• 代理人: 馮子玲

技術領域

本發明屬于制藥技術領域，涉及中藥有效成分的提取技術，具體為一種從中藥木鱉子中提取免疫佐劑成分的方法。

背景技術

木鱉子是我國傳統中藥葫蘆科植物木鱉(Momordica?cochinchinensis(Lour.)Spreng)的成熟種子，味苦，微甘，性溫，有毒，入肝、脾、胃經，具有消腫散結，攻毒療瘡功能。我們在前期的研究工作中采用乙醇回流提取、減壓濃縮、101澄清劑澄清、乙醚萃取、正丁醇萃取、吸附性大孔樹脂純化等步驟從木鱉子中獲得一種淡黃色帶清香味的木鱉子提取物粉末。通過醋酐一濃硫酸反應(Liebermann-Burchard?reaction)、氯仿一濃硫酸反應(Salkowskireaction)、泡沫反應、紫外光譜分析以及溶血試驗證明，該提取物含三萜皂甙。

免疫學試驗表明，該提取物具有免疫增強作用，可以顯著提高模式抗原OVA誘導的小鼠IgG的抗體水平。將該提取物和滅活O型口蹄疫抗原混合免疫豬，觀察免疫后血清抗體滴度、抗O型口蹄疫病毒VP1結構蛋白抗體水平的變化。結果表明該提取物和滅活口蹄疫疫苗混合的試驗組比對照組可以產生更高的抗口蹄疫病毒抗體滴度、抗O型口蹄疫病毒VP1結構蛋白抗體水平。該提取物對雞禽流感疫苗也顯示良好的佐劑作用。

有關木鱉子提取物的制備方法，已經獲得國家發明專利權(公開號：CN1748725)。由于其良好的免疫佐劑性能，正在申請用途方面的國家發明專利(公開號：CN1748792)。但是目前的提取方法得率較低，從每公斤原料藥材中只能獲得2克左右的提取物，在一定程度上限制該項發明的應用。

發明內容

本發明的目的是提供一種從中藥木鱉子中提取免疫佐劑成分的方法。所得到的木鱉子提取物為一種具有免疫佐劑作用的含三萜皂甙成分的黃色粉末。本發明在現有技術基礎上改進了提取工藝，大幅度提高了得率，從每公斤木鱉子中可獲得8克提取物。提取物中含有三萜皂甙成分，其佐劑作用和已有技術得到的提取物相同。

本發明從中藥木鱉子中提取免疫佐劑成分的方法包括以下步驟：

(1)將原料木鱉子粉碎后用石油醚浸泡脫脂，連續脫脂3-4次；

(2)將脫脂木鱉子粉末在70％乙醇中浸泡，回流提取2-5次，合并提取液，過濾，減壓濃縮；

(3)濃縮液揮去溶劑后得褐色固體，用水溶解，溶液離心后去沉淀；

(4)將去沉淀后的水溶液加進吸附性大孔樹脂柱，靜置15-30小時后，先后用水和30％乙醇洗柱去除雜質；

(5)用60-70％乙醇洗脫，減壓濃縮洗脫液，將濃縮的洗脫液真空干燥，得黃色粉末狀含免疫佐劑成分的木鱉子精提物。

按以上方法獲得的木鱉子粗提物或木鱉子精提物產品均為本發明的產品，該產品中含三萜皂甙類化學成分。

附圖說明

圖1：三組小鼠二免后血清抗體水平的比較，上標字母不同者表示有顯著差異(P＜0.05)

具體實施方式

實施例一

木鱉子提取物的制備??木鱉子3000g，粉碎，用石油醚脫脂3次，每次10.5L，共去掉脂質601.5g。殘渣用70％乙醇60℃回流提取5次，每次12L，合并提取液。減壓濃縮，揮干溶劑得175g褐色固體，用1.8L水溶解，溶液離心沉淀(1600g)。取上清液過D101吸附大孔樹脂柱，首先分別用水和30％乙醇洗脫，然后用60％乙醇洗脫，每次洗脫劑用量2倍柱體積。收集60％乙醇洗脫劑，揮干溶劑得26g淡黃色的粉末，得率為8.67克/公斤生藥。

實施例二

木鱉子提取物性質的分析：為證實本發明方法所得木鱉子提取物的性質，以及是否含有三萜皂甙等免疫佐劑有效成分，特進行以下試驗。

1.Molish反應：將組分配制成0.05％的水溶液，取2mL，加入幾滴10％α-甲萘酚乙醇溶液，然后加入1mL濃硫酸，有紫色環出現。

2.Libermann-burchard反應：取組分10mg溶于20mL正丁醇中，取2mL，加1mL冰乙酸，不振搖，加1mL濃硫酸，試管底部變為棕黃色，放置3～4h后，變為棕紅色。

3.泡沫反應：將組分配制成0.05％的水溶液，取2mL，用力振搖試管1min出現泡沫，靜置15min后仍有大量泡沫存在。