[發(fā)明專(zhuān)利]甘蔗花葉病抗病性鑒定的接種方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810058994.7
• 申請(qǐng)日: 2008-09-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101363835A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃應(yīng)昆;李文鳳;羅志明;盧文潔;王曉燕
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/48
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/48
• 代理公司: 昆明正原專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 陳左

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種甘蔗花葉病抗病性鑒定的接種方法。

背景技術(shù)：

甘蔗花葉病是一種世界性的甘蔗病害，近年來(lái)，在我國(guó)福建、廣東、廣西、四川和浙江等蔗區(qū)普遍發(fā)生，目前已成為云南蔗區(qū)發(fā)生最為普遍，危害最為嚴(yán)重的主要病害，全省年發(fā)病面積達(dá)100余萬(wàn)畝，其中嚴(yán)重發(fā)病面積達(dá)50余萬(wàn)畝，且有逐年擴(kuò)展蔓延加重危害之趨勢(shì)。感病品種，嚴(yán)重田塊發(fā)病率高達(dá)100％。甘蔗感病后一般造成10-40％的產(chǎn)量損失，糖份下降。其病原復(fù)雜，可由馬鈴薯Y病毒科(Potyviridae)的6種病毒單獨(dú)或復(fù)合浸染引起。主要靠蚜蟲(chóng)、帶病蔗種和蔗刀等收砍工具傳播。國(guó)內(nèi)外大量的研究表明：對(duì)甘蔗花葉病最經(jīng)濟(jì)有效的控制方法，就是選用抗病優(yōu)良品種。因此篩選抗源材料，供育種工作者合理選配親本組合，進(jìn)而選育出具有較穩(wěn)定抗病性的新品種，供生產(chǎn)上推廣應(yīng)用就顯得迫切需要。優(yōu)良抗源的篩選工作必須以數(shù)量多、范圍廣的甘蔗種質(zhì)資源抗性評(píng)價(jià)為基礎(chǔ)，因而急需研究建立一套快速簡(jiǎn)便、致病性穩(wěn)定、規(guī)范、實(shí)用的抗性鑒定技術(shù)。

目前甘蔗種質(zhì)資源對(duì)花葉病的抗性鑒定方法主要有大田病圃鑒定、田間自然感病鑒定和人工接種鑒定，它們各具有不同的缺陷，大田病圃鑒定和田間自然鑒定周期長(zhǎng)、占用土地面積大、鑒定材料數(shù)量有限；而且由于病圃和田間中的自然病原及種類(lèi)分布不均勻、氣候和傳播媒介等環(huán)境條件變化常常會(huì)影響鑒定結(jié)果的真實(shí)性、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性；人工接種鑒定快速簡(jiǎn)便、鑒定材料數(shù)量不受限制，且環(huán)境條件可人為控制，可以滿(mǎn)足大規(guī)模篩選抗源材料的需要，但現(xiàn)有的兩種接種方法：噴霧接種法和手指摩擦接種法在操作過(guò)程中都需要在接種前用手工搓揉蔗葉制造傷口，由于不易掌握搓揉力度，往往導(dǎo)致搓揉傷口不均勻，從而使接種后發(fā)病不均勻，致病性不穩(wěn)定，影響鑒定結(jié)果。此外，由于甘蔗葉片表面布滿(mǎn)毛群，葉緣鋸齒尖利，人工搓揉易劃傷手，也給具體操作帶來(lái)困難，導(dǎo)致接種費(fèi)工費(fèi)時(shí)，工效低。不適合對(duì)大批量甘蔗種質(zhì)資源進(jìn)行抗花葉病的快速鑒定。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是提供一種鑒定結(jié)果穩(wěn)定、可操作性強(qiáng)、接種工效高，適合對(duì)大批量材料進(jìn)行抗花葉病快速鑒定的接種方法。

本發(fā)明包括以下步驟：

1、制備病毒接種體：接種病毒源活體繁殖保存在甘蔗植株上。接種前取植株幼嫩的病葉組織剪細(xì)后，加入3倍量按體積重量比(V/W)濃度為0.1mol/L，PH值為7.2含0.2％?Na₂SO₄的磷酸緩沖液，研磨成勻漿，雙層紗布過(guò)濾，濾液即為病毒接種體；

2、甘蔗生長(zhǎng)期切莖接種：甘蔗生長(zhǎng)期時(shí)，在陰涼的傍晚用鋒利刀片或枝剪把甘蔗植株地上部分沿土表快速切去；

3、用滴管吸一滴病毒接種體滴入地下蔗頭創(chuàng)面上、使病毒接種體接觸地下蔗頭創(chuàng)面上，病毒侵入植株；

4、甘蔗創(chuàng)面遮光24小時(shí)后揭開(kāi)。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果在于：

(1)接種后甘蔗花葉病發(fā)病顯著、靈敏度高，可以有效的區(qū)分不同甘蔗品種之間對(duì)病害的抗感性；

(2)運(yùn)用切莖后在切口處點(diǎn)病毒液的接種方法，制造的傷口均勻，接種病毒量一致、接種后發(fā)病均勻、結(jié)果穩(wěn)定性好；

(3)由于帶毒收砍工具交叉感染是甘蔗花葉病傳播的主要途徑，而生長(zhǎng)期切莖接種法與此種傳播方式很相似，因此鑒定結(jié)果更接近于田間自然感病結(jié)果；

(4)本發(fā)明的接種方法快速簡(jiǎn)便、規(guī)范實(shí)用，不用人工搓揉甘蔗葉片，不易劃傷手，因而可操作性強(qiáng)、接種工效高；鑒定結(jié)果更接近于田間自然感病結(jié)果，因此適合對(duì)大批量材料進(jìn)行抗花葉病快速鑒定和篩選，為育種和生產(chǎn)部們提供更多更廣泛的抗源材料。

具體實(shí)施方式

1、供試甘蔗品種材料準(zhǔn)備

供試甘蔗品種材料：從脫毒健康苗圃選擇無(wú)病健壯蔗株，分別切成雙芽苗，在流動(dòng)冷水中浸泡48小時(shí)之后，用50±0.5℃熱水處理2～3小時(shí)，再用80％敵敵畏和50％多菌靈按體積比1：800液浸種5～10min，然后分別種植在塑料桶內(nèi)，置于防蟲(chóng)溫室，常規(guī)栽培管理；

2、接種病毒源及接種液準(zhǔn)備

接種病毒源活體繁殖保存在甘蔗植株上。接種前取植株幼嫩的病葉組織剪細(xì)后，加3倍量(V/W)濃度為0.1mol/L，PH值為7.2含0.2％?Na₂SO₄的磷酸緩沖液，研磨成勻漿，雙層紗布過(guò)濾，濾液即為病毒接種體；

3、接種方法