[發明專利]金環蛇抗菌肽cathelicidin-BF變異體cathelicidin-BF15及其應用

無效

• 申請號: 200810058977.3
• 申請日: 2008-09-27
• 公開（公告）號: CN101386640A
• 公開（公告）日: 2009-03-18
• 發明（設計）人: 賴仞;王義鵬;楊海龍
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明動物研究所
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;A61K38/10;A61P31/00
• 代理公司: 昆明今威專利代理有限公司
• 代理人: 楊宏珍

技術領域：

本發明提供一種金環蛇(Bungarus?fasciatus)抗菌肽cathelicidin—BF變異體cathelicidin—BF15及其應用，屬于生物醫學技術領域。

背景技術：

Cathelicidin是一個具有多功能的抗菌肽家族，目前僅在哺乳類、鳥類和魚類中有發現。Cathelicidin具有廣譜的抗菌活性，不僅對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、某些真菌以及病毒具有非常強的殺菌活性，而且對許多臨床耐藥細菌同樣具有作用。除此之外，cathelicidin還具有許多其他生物學活性，如對多種免疫細胞具有趨化作用、誘導肥大細胞脫粒和組織胺釋放、調節巨噬細胞轉錄、促進傷口愈合、誘導血管發生、誘導變異細胞系細胞凋亡和淋巴細胞活化等。由于具有如此眾多的活性，cathelicidin一直是國際上研究的熱點。針對cathelicidin的藥用開發則蘊含著巨大的臨床治療藥物制備價值。

隨著青霉素等傳統抗生素的大規模和不恰當使用，微生物對傳統抗生素產生了越來越強的耐受性，在臨床上已經出現了大量能夠完全耐受青霉素等傳統抗生素的微生物，已有的抗生素對這些病原微生物無能為力。抗菌肽是一種新型的抗微生物多肽，大多數抗菌肽分子量小于10000Da，帶正電，富含疏水堿基，能夠形成兩親性的結構。抗菌肽的殺菌機制主要是通過靜電相互作用吸引并結合到帶負電的細菌細胞膜表面，進一步在細菌細胞膜上形成跨膜的孔洞，導致細菌細胞內容物的外泄，從而導致細菌細胞的死亡。而傳統抗生素主要是作用于細菌細胞內的一些酶類。正是由于作用方式的不同，抗菌肽介導的殺菌作用遠遠快于傳統抗生素，并且不易使細菌產生耐受性。除此之外，越來越多的文獻報道表明抗菌肽還具有其他的殺菌機制，如抑制細菌細胞壁合成、改變細菌細胞質膜抑制隔膜形成、激活自溶素、抑制細胞內酶活性、抑制DNA、RNA和蛋白質的合成等。

目前，國外有許多公司正在進行抗菌肽的研究開發，已有多種抗菌肽進入臨床試驗階段。如來源于人lactoferrin的hLF-1—1用于治療骨髓干細胞移植相關的感染，已進入臨床II期。來源于非洲爪蟾magainin的MSI-78對糖尿病患者的足部潰瘍有顯著療效且副作用小，已進入臨床III期試驗階段。來源于豬protegrin的IB-367用于治療腫瘤患者口腔潰瘍，已進入臨床I期試驗。除此之外，一些用于傷口愈合，內毒素感染，腫瘤，病毒感染的抗菌肽也已進入臨床試驗階段。

在中國的傳統中藥和民族醫藥中，許多蛇類被作為藥材而得到廣泛的應用，如烏稍蛇，蟒蛇，蝮蛇，金環蛇，銀環蛇，眼鏡蛇，五步蛇等。蛇全身均可入藥，蛇肉具有強壯神經、延年益壽功效，可治療病后體弱、風痹麻木、關節疼痛等癥。蛇膽具有祛風、清熱、化痰、明目的功效，主治小兒疳積、痔瘡腫痛。蛇膽汁乙醇溶液能有效治療角膜炎、角膜潰瘍、角膜斑翳。以蛇膽汁、川貝母、杏仁為主要原料制成的“蛇膽川貝液”，是目前臨床使用方便、療效顯著的止咳祛痰良藥，蛇蛻具有祛風定驚、殺蟲、退翳消腫、清熱解毒的功能，可治目翳、瘡癤、痔漏、痄腮、瘧疾、小兒驚癇、疥癬、瘰疬等癥。蛇毒是目前國際藥材市場上十分昂貴的珍奇藥材，利用蝮蛇毒制成的注射液，具有明顯的抗癌、抗血凝作用。

與此同時，傳統中藥藥物成分的復雜性及其炮制方法的局限性造成藥物活性成分不能更好的發揮作用，因而從這些傳統藥物中尋找特定的活性單體化合物是中藥現代化的重要內容之一。迄今為止，國內外學者已經從蛇毒中分離出大量生物活性蛋白及多肽，其中的許多活性多肽具有很好的藥物開發前景。

金環蛇屬于眼鏡蛇科環蛇屬，是具有前溝牙的毒蛇，廣泛分布于中國南方各省及東南亞各國。目前關于金環蛇蛇毒蛋白，各種蛋白酶及抑制劑有大量報道，但是關于金環蛇蛇毒中抗菌肽的研究還沒有報道。

發明人將本發明的金環蛇抗菌肽cathelicidin-BF變異體cathelicidin—BF15全序列氨基酸結構經NCBI蛋白質數據庫進行搜尋比對，未發現有任何相同多肽。發明人將本發明的金環蛇抗菌肽cathelicidin-BF變異體cathelicidin-BF15編碼基因經NCBI基因數據庫進行搜尋比對，未發現有任何相同基因。

發明內容：

本發明的目的是基于上述理論研究和現有技術基礎，提供一種具有強烈的抗菌活性的金環蛇抗菌肽cathelicidin-BF變異體cathelicidin—BF15及其應用。

為了實現本發明的目的，本發明提供了如下技術方案：