[發(fā)明專(zhuān)利]一種神經(jīng)損傷治療藥物及其制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810058569.8
• 申請(qǐng)日: 2008-06-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101306194A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 熊郁良;王婉瑜;呂秋敏;吳健波;朱紹文;李瑞
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 奔馳生物科技（云南）有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61K38/18
• 分類(lèi)號(hào): A61K38/18;A61P25/00;A61K31/43;A61K31/7036
• 代理公司: 昆明今威專(zhuān)利代理有限公司
• 代理人: 趙云

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種神經(jīng)損傷治療藥物及其制備方法，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

目前國(guó)內(nèi)外在治療神經(jīng)損傷方面，都有采用單一的神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF或神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子NTF類(lèi)藥物的報(bào)道，有采用口服的(熊郁良等：治療外周神經(jīng)系統(tǒng)疾病和男性生殖缺陷的藥品的制備方法，專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?0116192.X，2001年7月25日公開(kāi))，也有采用肌肉注射的，雖然具有一定效果，但療效差。其原因是這些常規(guī)給藥方式所對(duì)應(yīng)的藥物，神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF在體內(nèi)的衰亡速度較快，在神經(jīng)損傷部位的劑量已經(jīng)很少，所以療效也就有限，特別是口服藥物的療效就更差。為了使損傷部位有較高的NGF，國(guó)內(nèi)外有采用單一植入NGF研究及試驗(yàn)，由于損傷部位缺少生存環(huán)境，缺乏促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)分化以及促進(jìn)神經(jīng)纖維生長(zhǎng)的NGF、NTF等因子，從而導(dǎo)致植入細(xì)胞過(guò)早凋亡，難以使受損部位的神經(jīng)細(xì)胞自身恢復(fù)生長(zhǎng)分化。另外有試驗(yàn)證明，過(guò)量注射N(xiāo)GF可能導(dǎo)致神經(jīng)纖維生長(zhǎng)過(guò)密，排列紊亂，影響郎氏結(jié)等形成，相反會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)傳導(dǎo)阻滯，產(chǎn)生癱瘓，所以大多采用較為安全的肌肉注射。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種神經(jīng)損傷治療藥物及其制備方法，所述的植入式藥物利于使培養(yǎng)細(xì)胞和損傷部位神經(jīng)細(xì)胞既獲得新的營(yíng)養(yǎng)和促生長(zhǎng)所需NGF，植入細(xì)胞又能盡快分離、增值到損傷神經(jīng)部位修復(fù)原被損傷、壞死或衰亡細(xì)胞，治療效果更安全、更顯著。

解決本發(fā)明的技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是：

本發(fā)明的藥物為被治療動(dòng)物的神經(jīng)干細(xì)胞與神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF或神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子NTF共同培養(yǎng)而成，其中活細(xì)胞含量不低于85％，NGF或NTF不少于2500單位～5000單位，細(xì)胞含量不少于400×10⁴個(gè)/ml～600×10⁴個(gè)/ml。所述的神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF或神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子NTF是從眼鏡蛇蛇毒中分離提取的物質(zhì)，也可以采用從人、鼠或其他動(dòng)物物種獲取的神經(jīng)生長(zhǎng)因子或神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。而所述藥物的有效成分中的神經(jīng)干細(xì)胞可以包括從臍帶血和嗅神經(jīng)細(xì)胞提取的。

本發(fā)明的制備工藝方法是：將從人胚胎或組織獲取的神經(jīng)干細(xì)胞的神經(jīng)節(jié)放在培養(yǎng)液中清洗，恒溫37℃培養(yǎng)48小時(shí)后，加入神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF或神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子NTF和培養(yǎng)液共同培養(yǎng)8天后，使細(xì)胞含量不少于400×10⁴個(gè)/ml～600×10⁴個(gè)/ml，活細(xì)胞含量不低于85％，NGF或NTF不少于2500單位～5000單位，制備成植入受損部位或脊髓軟脊膜的專(zhuān)用藥物。

制備方法還包括：神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF或神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子NTF是從眼鏡蛇蛇毒中分離提取；首先對(duì)神經(jīng)節(jié)清洗所用的培養(yǎng)液采用1640或199，然后對(duì)NGF或NTF共同培養(yǎng)所用的混合培養(yǎng)液為，占重量85％的1640或199基礎(chǔ)培養(yǎng)液和15％的新生小牛血清，并還另外加入了青霉素100單位/ml、鏈霉素100μg/ml，培養(yǎng)液保持在pH7.0；神經(jīng)干細(xì)胞采用不能繼續(xù)懷孕胎兒的脊髓，且新鮮脊髓取下在30分鐘內(nèi)，經(jīng)反復(fù)清洗后，剪碎成1mm的神經(jīng)節(jié)。

本項(xiàng)目從國(guó)產(chǎn)眼鏡蛇蛇毒中分離純化神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF，結(jié)構(gòu)測(cè)定結(jié)果表明與人β鏈、小鼠頜下腺NGF同源性達(dá)83％以上，但穩(wěn)定，含量為2/10000，高于其他動(dòng)物及組織含量。實(shí)驗(yàn)首先利用棉酚造成雄性大鼠生殖缺陷模型，證明其能顯著增加損傷后導(dǎo)致的精子數(shù)下降，提高精子活力，激素FSH、LH顯著降低，合籠后生植數(shù)、懷孕率顯著增加并接近正常對(duì)照組，與生理鹽水治療組相比P＜0.1，這表明該藥對(duì)男性生殖缺陷有較好的治療作用。病理檢查證明間質(zhì)細(xì)胞、支持細(xì)胞明顯恢復(fù)，精囊充盈，證明被損傷的生殖系統(tǒng)有明顯恢復(fù)。