[發(fā)明專利]一種煙葉在線醇化酶制劑及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810058181.8
• 申請日: 2008-03-14
• 公開（公告）號: CN101260387A
• 公開（公告）日: 2008-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝勇;何寶玉;韓偉
• 申請（專利權(quán)）人: 云南萬芳生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;A24B15/20
• 代理公司: 昆明正原專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 金耀生

1、一種煙葉在線醇化的酶制劑的制備方法，其特征在于按以下步驟進(jìn)行：

1)取鮮活煙葉或頂杈，破碎細(xì)胞，按體積比V_緩沖液∶V_汁液＝1∶9～10加緩沖液A：0.1MTris-HCL，pH7.7，0.1M?PMSF，于4℃，2600g離心20min；

2)取上清液，緩慢加入(NH₄)₂SO₄溶液至飽和，4℃緩慢混合30min，4℃15000g離心40min；

3)取上清液，加入等體積(NH₄)₂SO₄溶液，緩慢混合2小時或過夜，4℃15000g離心2h，收集沉淀，加緩沖液A：0.1M?Tris-HCL，pH7.7，0.1M?PMSF至沉淀充分溶解；

4)溶解完全后，按1∶0.1～0.2體積比加入緩沖液B：0.1M?Tris-HCl，pH7.7，0.1％EDTA(W/W)于4℃沉淀20min，8000g離心10min，獲上清液，棄沉淀；

5)上清液按1∶0.001～0.002體積比先后加入0.3％Ca(NO₃)2·4H₂O和0.2％MgSO₄溶液，充分混勻，靜置8-12小時或過夜；

6)按1∶0.01～0.02體積比加入0.01％蔗糖低聚物溶液，靜置1-1.5小時；溶液樣品于-8℃干燥濃縮至原體積的1/8時停止，4℃解凍分裝即獲得煙葉在線醇化酶制劑原液。

2、一種用權(quán)利要求1所述的煙葉在線醇化的酶制劑的制備方法制備的煙葉在線醇化的酶制劑。

3、權(quán)利要求2所述的煙葉在線醇化的酶制劑的應(yīng)用，其特征在于成品酶制劑在施用前用水稀釋至0.1～0.3％，煙葉分片后在真空回潮至含水率15.5％時，均勻噴施于煙葉上。