[發明專利]一種脫除7－木糖基紫杉烷中木糖基的方法

無效

• 申請號: 200810058005.4
• 申請日: 2008-01-07
• 公開（公告）號: CN101215589A
• 公開（公告）日: 2008-07-09
• 發明（設計）人: 王興紅;李松;張煜;周繼蓉
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: C12P17/02
• 分類號: C12P17/02;C12R1/465;C12R1/38;C12R1/01
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所屬技術領域：本發明屬于生物轉化領域

技術背景

紫杉烷是含有紫杉烷母核的多個化合物的總稱，屬于二萜類化合物。紫杉醇(paclitaxel，商品名taxol)是其中的一種，于1967年由美國化學家Wall和Wani等從太平洋紫杉(又名短葉紅豆杉，Taxus.brevifolia)樹皮中提取出來，是當前癌癥治療研究中的一線藥物(Wall?ME，Wani?MC，Taylor?HL.Isolation?and?chemical?characterization?of?antitumor?agent?from?plants.Cancer?Treat?Rep.1976，60：1011-1014；Wani?MC，Taylor?HL，Wall?ME，Coggon?P，McPhai?AT.VI：The?isolation?and?structure?of?taxol，a?novelantileukemic?and?antitumor?agent?from?Taxus?brevifolia.J.Am.Chem.Soc.1971，93：2325-2327)。紅豆杉類植物由于生長緩慢，資源極其珍貴，已被列入國家一級保護植物。為尋找替代資源，全世界做了大量的努力，目前尚無很好的解決辦法(Ramesh?N.Patel，Tour?de?paclitaxel?biocatalysis?forsemisynthesis，Annu.Rev.Microbiol，1998，98：361-394)。7-木糖紫杉烷類化合物在紅豆杉枝葉中的含量十分豐富，能達到紫杉醇含量的10倍。將7-木糖基紫杉烷類物質轉化成紫杉醇，是一種提高紅豆杉資源利用效率現實可行的方法。

將7-木糖基紫杉烷轉化為相應的紫杉烷，Murray等發明了用高碘酸鈉等化學法水解脫去7-木糖基紫杉烷中木糖基的方法，(Murray，ChristopherK，Beckvermit，et?al.United?States?Patent：5,412,116，1995，5，2。)。趙春芳等提出了氧化法水解紅豆杉浸膏中的7-木糖基紫杉醇生成紫杉醇的方法(趙春芳，余龍江，李麗琴等，氧化水解法提高紅豆杉浸膏中紫杉醇產率的研究，天然產物研究與開發，2006，18：95-99)。??但化學法脫木糖基所需的時間長，化學藥品有不同程度的毒性，還會污染環境；對于有多個手性中心的紫杉烷來講，過量的氧化劑、酸度、溫度等條件會引起紫杉烷的降解，導致紫杉烷的收率降低，對于紫杉醇這種昂貴的藥品來說，損失是很大的。

施貴寶公司發明了一種用微生物或酶的方法分解7-木糖基紫杉烷中木糖基的方法，并申報了相應的專利(US?Patent?5700669，1995，4)。在他們的專利中，報道了多個有水解7-木糖基紫杉烷中木糖基能力的細菌，分布在三個屬，即：桿菌屬(Bacillus)，莫拉氏菌屬(Moraxella)，微球菌屬(Micrococcus)等。本發明的目的在于獲得了一些新的產7-木糖基紫杉烷水解酶的微生物類群——鏈霉菌屬(Streptomyces)，如馬特鏈霉菌(Streptomyces?matensis)，異硫鏈霉菌(Streptomyces?althioticus)，Streptomyces?griseorubens.類芽孢桿菌屬(Paenibacillus)如Paenibacillus?pabuli，無色桿菌屬(Achromobacter)，如Achromobacter?spanius，Achromobacter?piechaudii.假單胞菌屬(Pseudomonas)，如惡臭假單胞菌(Pseudomonas?Putida)，Pseudomonas?asplenii等，它們具有較高的分解7-木糖基紫杉烷中木糖基的酶活。

特別是以下的菌種：馬特鏈霉菌[Streptomyces?matensis(x61)]，類芽孢桿菌[Paenibacillus?pabuli(m25)]，無色桿菌[Achromobacter?spanius(m55)]，惡臭假單胞菌[Pseudomonas?Putida(m129)]具有較高的水解7-木糖基紫杉烷中木糖基的能力.

發明內容

本發明使用新的微生物類群——鏈霉菌屬、類芽孢桿菌屬、無色桿菌屬、假單胞菌屬的微生物專一性地降解7-木糖基紫杉烷中木糖基，使7位的糖苷基水解成羥基。

本發明所述的7-木糖基紫杉烷降解成為相應紫杉烷的方法由以下步驟組成：