[發明專利]蕨菜多糖的提取分離方法

有效

• 申請號: 200810057862.2
• 申請日: 2008-02-19
• 公開（公告）號: CN101228949A
• 公開（公告）日: 2008-07-30
• 發明（設計）人: 羅云波;黃昆侖;許文濤;張方方
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: A23L1/28
• 分類號: A23L1/28;A23L1/212;A23L1/30
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司
• 代理人: 王朋飛

1.一種蕨菜多糖的提取分離方法，包括以下步驟：

1)取蕨菜粉碎過篩，用乙醇回流浸提；

2)去掉乙醇后用水浴上提取；

3)將上述浸提液離心、棄沉淀，取上清液；

4)將上清液脫去蛋白；

5)乙醇沉淀的方法分離：在脫去蛋白的溶液中加入乙醇進行沉淀，離心收集沉淀，干燥，得粗多糖；

6)陰離子交換柱和凝膠排阻層析純化多糖。

2.根據權利要求1所述的蕨菜多糖的提取分離方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)取蕨菜粉碎過篩，用2～4倍90％乙醇在80～100℃回流浸提0.5～2小時；

2)去掉乙醇加水，在60～90℃水浴上提取2～3次，每次2～4小時；

3)將上述浸提液離心、棄沉淀，取上清液；

4)用Sevage方法脫去上清蛋白；

5)乙醇沉淀的方法分離：在脫去蛋白的溶液中加入2～3倍于該溶液體積的乙醇進行沉淀，離心收集沉淀，干燥，得粗多糖；

6)陰離子交換柱和凝膠排阻層析純化多糖：取粗多糖溶于去離子水或Tris-HCl緩沖液，制成飽和溶液，離心棄沉淀，將上清樣于陰離子交換柱DEAE-Sepharose?Fast?Flow，以上述的Tris-HCl為洗脫液，再用NaCl梯度洗脫，苯酚-硫酸法跟蹤檢測，收集單一峰，透析去離子后上樣于凝膠排阻層析柱，以去離子水進行洗脫。用苯酚硫酸法跟蹤檢測，收集單一峰，冷凍干燥得純化的單一蕨菜多糖；

步驟1)中的樣品可以是干蕨菜或新鮮蕨菜；步驟2)中水的用量是干蕨菜樣品重量的15～25倍或新鮮蕨菜樣品重量的3倍。

3.根據權利要求1或2所述的蕨菜多糖的提取分離方法，其特征在于，步驟2)中水的用量是干蕨菜樣品重量的20倍，在60～75℃提取2.5～3.5小時。

4.根據權利要求3所述的蕨菜多糖的提取分離方法，其特征在于，提取溫度在62～68℃。

5.根據權利要求3所述的蕨菜多糖的提取分離方法，其特征在于，提取溫度是65℃，提取2次，每次3小時。

6.根據權利要求1所述的蕨菜多糖的提取分離方法，其特征在于，步驟5)中在-60℃真空冷凍干燥8～12小時。

7.根據權利要求1或2所述的蕨菜多糖的提取分離方法，其特征在于，步驟6)中的陰離子交換柱是DEAE-Sepharose?Fast?Flow柱；Tris-HCl緩沖液pH值為7～8，濃度為10～50mmol/L；NaCl梯度洗脫液濃度為0.2～0.8mol/L。

8.根據權利要求1所述的蕨菜多糖的提取分離方法，其特征在于，凝膠排阻層析柱是Sephacryl?S-400HR或Sephadex?G-100柱。

9.根據權利要求1所述的蕨菜多糖的提取分離方法，其特征在于，步驟6)中采用流動水透析；Tris-HCl和去離子水洗脫的流速控制在2ml/min。

10.根據權利要求1所述的蕨菜多糖的提取分離方法，其特征在于，步驟4)中的Sevage方法是：在上清液中加等體積的氯仿-正丁醇，氯仿與正丁醇的體積比為4∶1，充分震蕩后靜置10分鐘，4000～6000rpm離心10分鐘，反復多次直至完全脫去蛋白；步驟6)中所述的苯酚-硫酸法為：將0.2ml樣品用蒸餾水稀釋到2ml，加入6％的苯酚溶液1ml，再加入5ml濃硫酸，反應30分鐘后再用紫外分光光度計在490nm出檢測OD值。