[發(fā)明專利]ARD1的單克隆抗體及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810057772.3
• 申請日: 2008-02-18
• 公開（公告）號: CN101514230A
• 公開（公告）日: 2009-08-26
• 發(fā)明（設計）人: 壽成超;任婷婷;姜北海;吳健
• 申請（專利權）人: 北京市腫瘤防治研究所
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/18;G01N33/577;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京三友知識產(chǎn)權代理有限公司
• 代理人: 趙曉梅

技術領域

本發(fā)明涉及免疫學領域，具體地涉及針對ARD1的單克隆抗體及其制備方法、分泌該抗體的雜交瘤細胞系、所述單克隆抗體或其生物活性片段的應用。本發(fā)明還涉及利用所述單克隆抗體檢測樣品ARD1水平的試劑盒以及抗腫瘤藥物。

背景技術

惡性腫瘤的發(fā)病率近年來在全球范圍內(nèi)繼續(xù)呈上升之勢。由于惡性腫瘤的發(fā)病大多較為隱匿，早期沒有明顯癥狀，病人就診時往往已經(jīng)到了晚期，并且許多在臨床傳統(tǒng)病理及TNM分期表現(xiàn)相近的病人，其預后也差異很大，反映出惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的復雜性。目前尚缺乏能用于診斷或預后判斷的理想腫瘤標志物。如幾十年來作為消化道腫瘤的標志物CEA，在一些非腫瘤性疾病如胃炎、肝硬化、潰瘍性結腸炎中也可有升高，其特異性并不理想。因此，尋找與惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展相關的腫瘤標志物和(或)腫瘤抗原，對惡性腫瘤的臨床診斷、監(jiān)視病情發(fā)展及判斷預后均有重要意義，同時對腫瘤發(fā)生的分子機制也有重要意義。

蛋白質(zhì)乙酰化和去乙酰化是細胞內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄后修飾過程，這一過程調(diào)節(jié)細胞凋亡、細胞周期和腫瘤形成(Fu?M，Wang?C，Wang?J，ZafonteB?T，Lisanti?MP，Pestell?RG.Acetylation?in?hormone?signaling?and?thecell?cycle.Cytokine?Growth?Factor?Rev?2002；13：259-76)。蛋白氨基乙酰化作為一種重要的修飾過程影響著多種生物學行為。蛋白去乙酰酶抑制劑可提高組蛋白的乙酰化水平，初步臨床研究提示這類抑制劑有望成為潛在的抗腫瘤藥物。

Arrest?defective?1?protein(阻滯缺陷蛋白1，Ard1p)最初是在酵母中發(fā)現(xiàn)的，它參與酵母細胞的細胞周期、生長、孢子形成等過程(WhitewayM.Szostak?JW.The?ARD1 ?gene?of?yeast?functions?in?the?switchbetween?the?mitotic?cell?cycle?and?alternative?devel

研究發(fā)現(xiàn)ARD1可與缺氧誘導因子1α(hypoxia-inducible?factor?1α，HIF-1α)相互作用，在體外可乙酰化HIF-1α532位賴氨酸，從而對其起到負調(diào)控作用。同時，小鼠ARD1可變剪切體(mARD1²²⁵)對HIF-1α的乙酰化在HIF-1α降解過程中發(fā)揮重要作用(Jeong?JW，Bae?MK，Ahn?MY，et?al.Regulation?and?destabilization?of?HIF-1alpha?by?ARD1-mediatedacetylation.Cell?2002；111：709-20.)。然而，在人類細胞中沒有觀察到類似的ARD1對HIF-1α的調(diào)節(jié)作用。

盡管哺乳動物細胞中ARD1的生物學功能尚未完全闡明，研究結果初步提示ARD1與細胞增殖和生長直接相關。Lim等人研究發(fā)現(xiàn)ARD1通過激活β-catenin參與細胞增殖，而β-catenin可以進一步誘導參與細胞周期調(diào)控的cyclin?D1(Lim?JH，Park?JW，Chun?YS.Human?arrestdefective?1?acetylates?and?activates?beta-catenin，promoting?lungcancer?cell?proliferation.Cancer?Res?2006；66：10677-82.)。此外，ARD1干擾RNA可抑制細胞增殖，并使細胞周期阻滯于G1期，這一過程調(diào)節(jié)了參與細胞增殖的多種基因。此外，干擾NATH和ARD1的表達，可誘導細胞凋亡，并促使細胞對柔紅霉素誘導的細胞凋亡更加敏感(Arnesen?T，Gromyko?D，Pendino?F，Ryningen?A，Varhaug?JE，Lillehaug?JR.Induction?of?apoptosis?in?human?cells?by?RNAi-mediated?knockdown?ofhARD1?and?NATH，components?of?the?proteinN-alpha-acetyltransferase?complex.Oncogene?2006；25：4350-60.)。越來越多的研究表明，ARD1是一個參與細胞功能調(diào)節(jié)，和腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要分子。它也有望成為腫瘤治療的一個新靶點。