[發明專利]誘導人胚胎干細胞定向分化為肝細胞的方法及專用培養基

有效

• 申請號: 200810057539.5
• 申請日: 2008-02-02
• 公開（公告）號: CN101497872A
• 公開（公告）日: 2009-08-05
• 發明（設計）人: 裴雪濤;裴海云;王韞芳;白宗良;楊印祥;習佳飛;岳文;南雪;白慈賢
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院野戰輸血研究所
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司
• 代理人: 邸萬杰

1.用于體外誘導人胚胎干細胞定向分化為肝細胞的培養基，包括依次使用的以 下四種培養基：其中，

分化培養基Ⅰ即擬胚體分化培養基：是在DF-12培養基的基礎上添加了15-25％ 血清替代物，0.05-0.15mM?β-巰基乙醇和0.5-1.5mM谷氨酰胺，pH?7.2-7.6；

分化培養基Ⅱ即定型內胚層分化培養基：是在DF-12培養基的基礎上添加了 0.5-1.5％胎牛血清，0.05-0.15mM?β-巰基乙醇，0.5-1.5mM谷氨酰胺，和100ng/mL 活化素A，pH?7.2-7.6；

分化培養基Ⅲ即肝細胞誘導條件培養基：是按體積比1-4∶4-1比例混合的FLSC 條件培養液與HepatoZYME-SFM，pH?7.2-7.6，所述FLSC條件培養液的配方為：每100mL 培養基含HDMEM培養基45mL，DF-12培養基45mL，胎牛血清10mL；

分化培養基Ⅳ即肝細胞誘導分化培養基：是在分化培養基Ⅲ的基礎上添加了 15-25ng/mL肝細胞生長因子HGF，5-15ng/mL制瘤素OSM和10^-6-10^-8M地塞米松DEX， pH?7.2-7.6。

2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于：所述分化培養基Ⅰ和分化培養 基Ⅱ中β-巰基乙醇的濃度為0.1mM，谷氨酰胺的濃度為1mM；所述分化培養基Ⅲ中FLSC 條件培養液與HepatoZYME-SFM按1∶1比例混合；所述分化培養基Ⅳ中添加了20ng/mL 肝細胞生長因子HGF，10ng/mL制瘤素OSM和10^-7mM地塞米松DEX。

3.根據權利要求1或2所述的培養基，其特征在于：所述分化培養基Ⅰ和分化 培養基Ⅱ中還添加有作為營養物質的體積百分濃度0.5-1.5％的非必需氨基酸。