[發明專利]紅細胞免疫體外中藥藥敏實驗方法

無效

• 申請號: 200810055246.3
• 申請日: 2008-06-19
• 公開（公告）號: CN101294960A
• 公開（公告）日: 2008-10-29
• 發明（設計）人: 常國良
• 申請（專利權）人: 常國良
• 主分類號: G01N33/556
• 分類號: G01N33/556;G01N33/15
• 代理公司: 山西五維專利事務所（有限公司）
• 代理人: 李毅

技術領域

本發明涉及紅細胞免疫功能檢測技術，具體涉及一種利用紅細胞免疫功能檢測方法進行藥敏實驗的方法，本發明首次利用紅細胞免疫功能進行體外中藥藥敏實驗。

背景技術

自1658年紅細胞被發現后，一直認為其是氧氣和二氧化碳的運輸者。隨著科技的進步，人們逐漸認識到了紅細胞的更多功能。1981年，美國生殖免疫學家Siegel在前人研究的基礎上，首先提出了“紅細胞免疫系統”的新概念，更新了人們對紅細胞功能的認識。隨著天然免疫研究的升溫，1990年，Paccaud對紅細胞膜補體受體進行了比較研究，發現了其簇狀分布的結合位點。2004年郭峰提出“紅細胞天然免疫主干道理論”，認為抗原進入血液中，首先被補體系統識別，抗原旁路激活補體黏附補體成份，然后絕大部分附有補體成份的抗原被紅細胞天然免疫黏附，最終由紅細胞遞交給白細胞，引發白細胞產生一系列免疫反應。當今，紅細胞免疫已成為多學科研究的橋梁與工具。

紅細胞數目眾多，其免疫功能是其他免疫細胞所無法替代的。紅細胞免疫的基礎是紅細胞表面具有C3b受體(C3bR)，紅細胞膜上的C3bR具有免疫黏附、攜帶及清除循環液相中抗原異物的功能，尤其清除循環免疫復合物(CIC)是紅細胞最主要的免疫功能。通過C3bR與C3b調理過的CIC結合，將其運送到肝脾等網狀內皮系統加以清除，防止CIC在體內沉積，從而避免血管或組織的損傷。而這種免疫能力主要取決于紅細胞膜上的C3bR數量，因此，紅細胞C3bR是衡量紅細胞免疫功能狀態的主要指標，在運送和清除免疫復合物(IC)方面起著重要作用。

現已建立的各種紅細胞免疫功能檢測方法多以紅細胞表面的C3bR為基礎設計，主要有紅細胞C3bR花環及IC花環試驗、紅細胞SPA酵母混合花環試驗、單克隆抗體Coombs試驗、抗C3bR單克隆抗體法、ELISA、放射配體結合法、紅細胞促吞噬作用測定法等。其中紅細胞C3bR花環率和IC花環率可作為紅細胞免疫黏附功能的指標，如二項指標都低下，判為原發性細胞免疫功能低下，為紅細胞C3bR受到破壞和影響所致；如果紅細胞C3bR花環率低，而IC花環率高，為繼發性紅細胞免疫功能低下，是由于CIC增加，紅細胞黏附IC過多引起。

中國人民解放軍第二軍醫大學第一附屬醫院郭峰等人根據Siegel的紅細胞免疫黏附試驗原理，建立了簡易的紅細胞C3bR花環試驗與紅細胞IC花環試驗(郭峰改良法)。該試驗方法采用致敏和未致敏的酵母菌試劑作為紅細胞免疫功能檢測試劑，C3b致敏酵母菌試劑用于紅細胞C3bR花環試驗，未致敏酵母菌試劑用于紅細胞IC花環試驗。郭峰改良法檢測紅細胞免疫黏附功能簡單易行，檢測結果可靠，成為了目前開展紅細胞免疫黏附功能檢測的主要方法。

紅細胞免疫是當今醫學研究的一個新領域，各國學者都在致力于探索并努力將研究成果應用于臨床診斷，而對于紅細胞免疫功能檢測方法的運用則是其中的一個重要課題，將有助于人類確診和檢測生理性、病理性疾病的起因、演化，并獲取治療效果的監測數據。

將紅細胞免疫功能檢測方法應用于體外中藥藥敏實驗，并對其免疫學原理進行研究，目前尚未見有報道。

發明內容

本發明的目的是為中醫臨床用藥及治療機理研究提供一種安全、簡便、客觀有效的體外藥敏實驗方法，以避免中藥應用的主觀性和隨意性。

本發明的紅細胞免疫體外中藥藥敏實驗方法是采用紅細胞免疫酵母菌花環試驗為基礎，將中藥藥物作為干預因素，分別對加入中藥的藥物干預組、無干預的空白對照組、生理鹽水干預的實驗對照組的紅細胞免疫指標RBC-C3bRR進行檢測，據檢測結果確定該中藥的敏感程度。如果該中藥對紅細胞RBC-C3bRR發生正向調節，表現為RBC-C3bRR升高，則判屬為敏感有效藥物；如果發生負向調節或不發生調節作用，為不敏感或無效藥物。本發明的實驗方法對中醫辨證施治可起到體外以藥測證的作用，將中醫辨證施治客觀指標化。

本發明的紅細胞免疫體外中藥藥敏實驗的具體方法為：

無干預的空白對照組：

1)、取動物肝素抗凝血，離心分離，提取血漿備用，將紅細胞配制成1.25×10⁷/mL的細胞懸液；

2)、將酵母菌配制成1.0×10⁸/mL的酵母菌溶液；