[發(fā)明專利]漁用腸溶口服疫苗及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810053428.7
• 申請日: 2008-06-05
• 公開（公告）號: CN101283985A
• 公開（公告）日: 2008-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫金生;王守斌;耿緒云;韓超;王雪惠;董學(xué)旺;李翔
• 申請（專利權(quán)）人: 天津市水產(chǎn)研究所;天津愛勒易醫(yī)藥材料有限公司
• 主分類號: A61K9/16
• 分類號: A61K9/16;A61K9/28;A61K47/38;A61P37/00
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司
• 代理人: 趙慶

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于漁用口服疫苗領(lǐng)域。

背景技術(shù)

養(yǎng)殖魚類的疾病呈逐年增加趨勢，所造成的經(jīng)濟(jì)損失巨大，嚴(yán)重阻礙了水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。目前控制各種疾病的主要手段是廣泛、大量的投入化學(xué)藥物和抗生素，而長期大量使用化學(xué)藥物和抗生素的結(jié)果，產(chǎn)生了環(huán)境污染問題，致病性和非致病性微生物耐藥性問題，以及藥物殘留超標(biāo)的食品安全問題；例如多寶魚事件就是典型的例子，受到多方密切關(guān)注。目前，國家已明令禁止生產(chǎn)和使用危害嚴(yán)重的藥物。提高水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病防控能力迫在眉睫。隨著綠色環(huán)保食品和環(huán)境保護(hù)的要求以及免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展，免疫防治技術(shù)在疾病防治中的應(yīng)用已越來越受到重視。應(yīng)用疫苗、免疫增強(qiáng)劑等活化或加強(qiáng)動物自身的特異性和非特異性免疫功能，提高抗病能力，是今后防治病害最為有效的途徑之一，是我國科學(xué)研究重點支持的領(lǐng)域之一。

國內(nèi)外相繼開展了應(yīng)用疫苗防治養(yǎng)殖魚類疾病的技術(shù)研究，制備了多種漁用疫苗，有浸泡、注射、口服三種劑型。由于浸泡接種具有疫苗消耗量大，免疫效果差的缺點，注射接種疫苗要求有一定的操作技術(shù)，且操作過程繁瑣，工作量大，均不適宜生產(chǎn)應(yīng)用。口服接種具有免疫效率高，疫苗需求量適中，操作方便的優(yōu)點，適宜在生產(chǎn)中大規(guī)模應(yīng)用，成為當(dāng)前研究熱點。

目前的研究主要集中在微粒、微膠囊方面。一種研究用聚乳酸-乙醇酸共聚物PLG和聚乙烯醇(產(chǎn)品型號1788)采用復(fù)乳揮發(fā)法制備嗜水氣單胞菌口服疫苗，但沒有報道PLG、聚乙烯醇組合比例，產(chǎn)品相對免疫保護(hù)率為42.9％(丁詩華，《西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報》2005年27卷6期)。一種研究采用海藻酸鈉、6％PVP-30制備了銀鯽嗜水氣單胞菌微膠囊疫苗，產(chǎn)品相對免疫保護(hù)率61.1％(李新華，《水生生物學(xué)報》2007年第31期)。這兩種研究均是希望實現(xiàn)遞送疫苗有效作用于腸道粘膜免疫相關(guān)淋巴組織的目的。但是，以上技術(shù)沒有進(jìn)行相關(guān)魚類胃腸道消化生理特性的研究，也沒有進(jìn)行腸溶性實驗觀察，不能建立起適宜的疫苗控釋技術(shù)，缺少微粒、微膠囊疫苗體內(nèi)、體外釋放的觀察，不能明確微粒、微膠囊疫苗在胃腸道中的釋放部位。其制備技術(shù)所采用的材料不具備確定的pH依賴性，只能實現(xiàn)口服遞送并發(fā)揮一定的緩釋作用，不能有效實現(xiàn)腸道釋放的目的，如果疫苗釋放過早，將被胃酸、消化酶消化、破壞，不能有效保護(hù)疫苗作用于腸道粘膜免疫相關(guān)淋巴組織。而且以上技術(shù)制備過程中需要將疫苗混溶到高分子材料的有機(jī)溶劑中，有機(jī)溶劑的存在會破壞疫苗的免疫源性，導(dǎo)致疫苗免疫效果不穩(wěn)定，進(jìn)一步限制了其在生產(chǎn)中的應(yīng)用。

由于受胃腸道因素的影響，多數(shù)蛋白類藥物易失活且吸收差，致使生物利用度差，其口服給藥系統(tǒng)仍面臨挑戰(zhàn)。(疫苗口服接種及其微粒傳輸系統(tǒng)，李鳳前，費軼博等，藥學(xué)學(xué)報，2007年，42(3)：322-328。口服疫苗傳遞系統(tǒng)研究進(jìn)展，宋洪濤，張倩等，解放軍藥學(xué)學(xué)報，2005年，21(1)：47-50)。因此，口服疫苗需要解決的關(guān)鍵點之一是如何保證疫苗順利地通過胃部，而不被胃酸、胃消化酶環(huán)境所破壞，在腸道中充分釋放，有效作用于腸道粘膜免疫相關(guān)淋巴組織，高效激發(fā)免疫應(yīng)答。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種魚用腸溶口服疫苗的制備方法，采用多層功能性包被技術(shù)，通過改變含有疫苗的丸芯或微粒及其包被層的結(jié)構(gòu)以及包被層成分及其含量，使其可以在魚胃液中起到保護(hù)疫苗的作用，在魚腸道中釋放出疫苗，發(fā)揮免疫作用。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：漁用腸溶口服疫苗，其特征在于，包括外周噴涂疫苗層2的顆粒或微丸1、在疫苗層2外逐層包衣隔離層3和腸溶層4；用于疫苗噴涂及隔離層包衣的干粉組合物A，和用于腸溶層包衣的干粉組合物B的組分及重量比分別為：

干粉組合物A：成膜劑選用羥丙基甲基纖維素、聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮的一種或一種以上，重量比為40～60份；增塑劑選用三磷酸甘油酯、檸檬酸三乙酯或聚乙二醇的一種或一種以上，重量比為3～10份，防粘劑選用二氧化硅、硬脂酸鎂、滑石粉或二氧化鈦的一種或一種以上，重量比為30～50份，表面活性劑選用卵磷脂、吐溫-80的一種，重量比為0～5份；

干粉組合物B：成膜劑是丙烯酸樹脂、羥丙甲基纖維素酞酸酯或羧甲基纖維素鈉的一種或一種以上，重量比為40～60份，增塑劑是鄰苯二甲酸二乙酯或檸檬酸乙酰基三丁酯的一種或一種以上，重量比為10～20份，防粘劑是滑石粉、二氧化硅或二氧化鈦的一種或一種以上，重量比為20～50份。

由于魚用疫苗易受溫度、酸堿度、胃蛋白酶影響，直接口服接種會損壞疫苗，降低疫苗免疫效果，無法口服給藥。