[發明專利]一種測定一氧化氮生成的熒光探針及其應用

無效

• 申請號: 200810053245.5
• 申請日: 2008-05-26
• 公開（公告）號: CN101302425A
• 公開（公告）日: 2008-11-12
• 發明（設計）人: 歐陽杰;張峻峰;洪浩;沈紅芹;張有來;趙勇;李明亮
• 申請（專利權）人: 天津理工大學
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;G01N21/64;G01N33/80
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司
• 代理人: 侯力

1.一種用于測定一氧化氮生成的熒光探針的合成方法，其特征在于該熒光探針是二價銅離子 Cu²⁺與有機配位體2-(-2-羥基苯基)苯并咪唑類衍生物形成的銅配合物，其結構為式(I)或(II)：

合成方法如下：

a.分別將300mmol取代水楊醛1a-d在攪拌下溶于125ml的甲醇中，然后加入150mmol的取 代鄰苯二胺2a或2b用于制備式(I)的銅配合物；或分別將300mmol取代水楊醛1a-d，1e，1f在 攪拌下溶于125ml的甲醇中，然后加入150mmol的取代鄰萘二胺2c用于制備式(II)的銅配合 物，室溫攪拌1小時，生成相應的沉淀物，過濾收集沉淀物，甲醇洗滌，真空干燥得到配體Aa-h 或Da-f；

b.將13mmol的配體Aa-h或Da-f溶于100ml氯仿中，再加入由2.5g?Mn(II)Cl₂·4H₂O溶于 40ml乙醇所制得的溶液，生成褐色溶液，再將此溶液在通入空氣的情況下攪拌12小時，得咖啡 色溶液，室溫攪拌24小時并濃縮，生成咖啡色沉淀，過濾出沉淀物，用DMF洗滌，再用少量乙 醇洗滌，真空干燥得到三價錳配合物Ba-h或Ea-f；

c.將200mg以上得到的三價錳配合物B溶于10ml水和5ml甲醇中，加入少量6mol/L?NaOH 溶液，調節溶液的PH為10，然后室溫下攪拌12小時，過濾出沉淀物，濾液中加入少量醋酸，中 和至PH＝5，用乙酸乙酯提取溶液，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，得產物，用薄層層析或者 柱層析分離，乙酸乙酯/正己烷＝1∶1為展開劑，分離出目的產物，用乙酸或者乙醇重結晶得到2-(2- 羥基苯基)苯并咪唑類衍生物3a-h或4a-f；

d.分別取上步生成的2-(2-羥基苯基）苯并咪唑類衍生物3a-h或4a-f2mg溶于10ml乙醇，與等 體積等摩爾硫酸銅水溶液在室溫下形成配合物，常溫揮發溶劑，產物以乙醇和去離子水各洗滌三 次，即得2-(2-羥基苯基)苯并咪唑類衍生物-銅配合物產物3a-h-Cu或4a-f-Cu；

具體合成路線如下：

2.一種權利要求1所述方法合成的熒光探針的應用，其特征在于：在各類非生物環境中，利 用所述的銅配合物熒光探針捕獲體系中的NO，使得熒光探針的熒光強度顯著增強，然后通過熒光 測定法來確定NO的產生。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：所述熒光測定法除了常規的熒光測定法外，還 包括時間分辨熒光測定法及時間分辨熒光顯微鏡成像測定法。

4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：應用于化學體系中的NO的檢測。