[發(fā)明專利]牛白細(xì)胞干擾素的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810052655.8
• 申請日: 2008-04-08
• 公開（公告）號(hào): CN101250223A
• 公開（公告）日: 2008-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 古長慶
• 申請（專利權(quán)）人: 天津生機(jī)集團(tuán)股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/555
• 分類號(hào): C07K14/555;C07K1/14
• 代理公司: 天津市三利專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 劉英蘭

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說，是涉及一種治療牛病毒性疾病的牛白細(xì)胞干擾素的制備方法。

背景技術(shù)

隨著國民經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展及農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的科學(xué)調(diào)整，奶牛業(yè)成了畜牧業(yè)中發(fā)展速度最快的一個(gè)熱點(diǎn)產(chǎn)業(yè)。在奶牛業(yè)飛速發(fā)展的大好背景下，奶牛的流動(dòng)性大大增加，奶牛的集約化生產(chǎn)程度和泌乳性能進(jìn)一步提高，奶牛疾病對奶生產(chǎn)所造成的影響變得越來越突出。如何有效防治奶牛疾病、減少經(jīng)濟(jì)損失，成為大家非常關(guān)心的問題之一。病毒傳染病是奶牛的大規(guī)模殺傷性疾病。病毒傳染病主要包括牛病毒性腹瀉—黏膜病、口蹄疫、牛流行熱、牛流行熱、藍(lán)舌病、瘋牛病等。例如，牛病毒性腹瀉或稱牛粘膜病是牛的一種重要的傳染病。以發(fā)熱、白細(xì)胞減少、口腔及消化道粘膜糜爛、壞死和腹瀉為特征，但大多數(shù)牛是隱性感染。

牛病毒性疾病仍是當(dāng)前嚴(yán)重制約養(yǎng)牛業(yè)健康發(fā)展的主要傳染病。全國每年均有上千萬頭牛在不同季節(jié)發(fā)生病毒性傳染病。牛一旦感染發(fā)病，則有起病急，臨床癥狀嚴(yán)重，極易傳播擴(kuò)散，以及病死率和死亡率均較高的特點(diǎn)，對養(yǎng)殖業(yè)危害極大。牛病毒性疾病至今尚無有效的治療藥物和治療方法。近年來曾經(jīng)有人進(jìn)行過用中草藥制劑預(yù)防和治療牛病毒性疾病的試驗(yàn)，但治愈率較低?？股丶盎前奉愃幬锘緹o效。目前，牛干擾素是治療牛病毒性疾病的有效藥物。干擾素的抗病毒作用并不是直接作用于病毒，而是通過與細(xì)胞受體連接，誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生另一類蛋白質(zhì)而發(fā)揮效能。這些蛋白質(zhì)又稱抗病毒蛋白。主要包括蛋白激酶、2-5合成酶等。這些酶可以使病毒蛋白合成受抑制，使病毒降解。

干擾素抗病毒具有以下特點(diǎn)：

1、干擾素抗病毒不是殺滅而是抑制病毒，一旦撤去干擾素，病毒往往又重新繁殖。只有用足夠濃度的干擾素，長期使用，才有可能將其徹底消滅。這就是為什么干擾素需要長期治療的原因所在。

2、干擾素具有種屬特異性，人干擾素一般只用于治療人的疾病。

3、不同的細(xì)胞種類和不同的動(dòng)物、不同的病毒感染類型對干擾素的敏感性不同。所以，各種類型的干擾素臨床療效也有所不同。

目前，白細(xì)胞干擾素研發(fā)工作已取得重大突破，現(xiàn)在養(yǎng)殖場和動(dòng)物醫(yī)院廣泛使用有豬細(xì)胞干擾素和禽基因工程干擾素。結(jié)果證明，其療效優(yōu)于市場現(xiàn)有的其它產(chǎn)品的效果。

95111427.1提供一種豬白細(xì)胞干擾素注射劑及其制備方法；

02138397.9提供一種重組γ-干擾素預(yù)防和治療奶牛隱性乳房炎的方法；

200410065926.5提供一種豬白細(xì)胞干擾素的制備方法；

200610124195.6提供一種豬β干擾素重組腺病毒及其構(gòu)建方法和應(yīng)用；

200610124194.1提供一種豬α干擾素重組腺病毒及其構(gòu)建方法和應(yīng)用；

200610130621.7提供一種牛γ-干擾素在重組桿狀病毒中的表達(dá)及抗病毒活性的測定的方法。

但有關(guān)利用牛血制備牛白細(xì)胞干擾素的方法還未見報(bào)道。

因此，提供一種有效預(yù)防和治療牛病毒性疾病的牛白細(xì)胞干擾素的制備方法，是該技術(shù)領(lǐng)域科研人員急需開發(fā)的新課題之一。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服上述技術(shù)中的不足之處，提供一種牛白細(xì)胞干擾素的制備方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明所采用的實(shí)施方式如下：

一種牛白細(xì)胞干擾素的制備方法，其特征在于具體實(shí)施步驟如下：

(1)無菌采集牛血，加入10μg/ml卡那霉素和適量抗凝劑，4.0℃冰箱放置；以2000-4000rpm離心牛血，收集灰黃層，用培制好的培養(yǎng)液稀釋細(xì)胞沉淀物，使白細(xì)胞濃度稀釋為每ml含1×10⁵-1×10⁷；

(2)白細(xì)胞懸液中加入少量干擾素，使其最終濃度為100-600單位/ml，于37℃水浴攪拌培養(yǎng)2-3小時(shí)；

(3)在啟動(dòng)的白細(xì)胞懸液中再加入適量誘生劑新城疫病毒，使其最終濃度為128-1280血凝單位/ml，37℃搖床攪拌培養(yǎng)18-24小時(shí)；

(4)待干擾素達(dá)到最高峰時(shí)，離心收集上清，加入鹽酸調(diào)至pH2.0，4.0℃，放置1-4天，滅活病毒，再加NaOH調(diào)至pH7.0，即得粗制牛白細(xì)胞干擾素。