[發明專利]一種江米酒酒藥微生物源凝乳酶的制備方法

有效

• 申請號: 200810052629.5
• 申請日: 2008-04-08
• 公開（公告）號: CN101250513A
• 公開（公告）日: 2008-08-27
• 發明（設計）人: 王艷萍;程巧玲;張陽
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N9/52
• 分類號: C12N9/52
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司
• 代理人: 侯力

1.一種江米酒酒藥微生物源凝乳酶的制備方法，其特征在于：該方法利用江米面作為培養基，通過酒藥發酵生產江米酒，采用硫酸銨分級沉淀法從江米酒中提取凝乳酶，進一步使用Sephadex?G-100和DEAE-Sephadex?A-50純化凝乳酶，其具體步驟包括：

第一、江米酒的制備：以10g/100mL的江米面溶液、115℃滅菌20min，室溫下冷卻至30℃作為培養基，將酒藥按0.0032g酒藥/g江米面的接種量，加入前述冷卻好的培養基中，140轉/分鐘振蕩培養50～54小時，得到江米酒；

第二、離心：將第一步得到的江米酒在4℃、3500轉/分鐘條件下離心10min，取上清液備用；

第三、凝乳酶的提取：將硫酸銨烘干研細，取第二步得到的上清液，向其中緩慢加入硫酸銨粉末至其飽和度達到40％，4℃靜置2小時后，以7000轉/分鐘離心15min，取上清液，繼續加入硫酸銨粉末至其飽和度達到90％，4℃靜置2小時，以8000轉/分鐘離心15min，沉淀溶于0.005mol/L、pH6.28的磷酸鹽緩沖液中，4℃透析48小時，即為凝乳酶粗液。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于將上述第三步得到的凝乳酶粗液進行如下純化：

首先利用Sephadex?G-100凝膠柱層析純化凝乳酶粗液，以0.005mol/L、pH6.28的磷酸鹽緩沖液作為洗脫液，分步收集，檢測收集液活性，合并有活性的洗脫液；

利用DEAE-Sephadex?A-50進一步純化，以0.02mol/L、pH?7.4的磷酸鹽緩沖液為起始緩沖液，采用NaCl梯度洗脫，分布收集，檢測活性，合并有活性洗脫液，濃縮凍干得到高純度的凝乳酶。