[發明專利]人參水溶性蛋白的膜分離純化制備方法

無效

• 申請號: 200810051560.4
• 申請日: 2008-12-09
• 公開（公告）號: CN101423545A
• 公開（公告）日: 2009-05-06
• 發明（設計）人: 趙雨;幺寶金;趙大慶;惠歌;張巍;李紅艷
• 申請（專利權）人: 長春中醫藥大學
• 主分類號: C07K1/34
• 分類號: C07K1/34
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責任公司
• 代理人: 張景林;劉喜生

技術領域

本發明屬于蛋白質分離純化技術領域，具體涉及一種采用緩沖液浸提、微濾和超濾相結合的人參水溶性蛋白的分離純化制備方法。

背景技術

人參蛋白及多肽的研究始于六十年代，主要集中于人參多肽的提取方法。1963年，德國的F.Gstirnor等人首次從人參根中檢測出多種氨基酸：谷氨酸、半光氨酸、酪氨酸等。1966年他們(Arch?Pharm.1966，299(11)：934～937)又采用電泳的方法從高麗白參的甲醇水提取液中得到5個小肽，未確定出一級結構。1980年，日本人Ando與Okada(Planta?Medica.1980，38：18～21)等發現人參水提取液中有一種強烈抑制腎上腺素誘導的脂肪分解的物質，此物質能被鏈霉蛋白酶(pronase)破壞，估計為蛋白或肽類化合物。經DEAE-Cellulose，Sephadex?G-10，Avicel-Cellulose，Phosphoric-Cellulose等色譜手段分得一個14肽，氨基酸組成為2Asp，Thr，Ser，3Glu，3Gly，Ala，Val，Leu，lle，未測出一級結構，之后也未查到繼續研究此肽的報道。1990年Takaku和Okada(Planta?Medica.1990，56：27～30)等又報道從高麗紅參中得到一種酸性物質，可以抑制腎上腺素誘導的脂肪分解并能刺激胰島素參與的脂肪合成，并確定該酸性物質為焦谷氨酸。同時他們還指出紅參中可能有一種非肽物質也有此活性。在此期間，韓國的Kim(CA.108：68730s，107：242499p)等報道從人參中分離純化到有抗脂肪分解活性的寡肽，但未給出一級結構。Yagi等人1994年從人參中提取到一種四肽成分：Val-D-Glu-D-ArG-Gly。并證明一些非蛋白氨基酸對其調節神經系統活性至關重要。魏俊杰等人(白求恩醫科大學學報.1990，16(5)：436～438)從生曬參中分離出兩種人參多肽，分別是分子量為1kDa的11肽和分子量為1.3kDa的12肽，它們具有降低2BS細胞內多糖含量和增強2BS細胞內琥珀酸脫氫酶活力的作用。Chen等(Peptide?Research.1998，52：137～142)人利用水醇提取法，結合離子交換、凝膠過濾和RP-HPLC從人參中分離出六種含α氨基酸的小肽，并通過氨基酸序列分析已測定其結構為氧化性的谷胱甘肽及其類似物，實驗證明，它具有調節動物睡眠的作用。另外，一種14肽也從人參中提取出來，結構為：Glu-Thr-Val-Glu-lle-lle-ASP-Ser-Glu-Gly-Gly-Gly-ASP-Ala，它具有強烈的抗脂解活性(Jounal?of?Chromatography?B.1996，687：443～448)。吉林大學的張今等(高等學校化學學報.1985，61(4)：376～380)，1985年報道用717型和732型離子交換樹酯柱從人參花蕾中分得兩個酸性肽，氨基酸組成分別為I：ASP-Thr-Ser-Glu-Gly-Ala-Val-Mat-Leu-Phe-Arg，分子量大于1.5kDa。II：ASP-Thr-Ser-Glu-Gly-Ala-Val-lle-Leu-Lys，分子量大于1.2kDa。1988年，他們(吉林大學自然科學學報.1988，4：75～78)又按照日本人Ando的分離程序及改進的分離程序(用Sephadex?G-25凝膠過濾)從人參中分離出一個具有胰島素作用的14肽，認為是Ando得到的14肽，但存在一個氨基酸的差異，并用DABlTC/PlCTC雙偶合法測定了序列為Glu-Thr-Val-Glu-lle-lle-ASP-Ser-Glu-Gly-Gly-Gly-ASP-Ala。其后，又用CD譜研究了該肽的二級結構(生物化學與生物物理學報.1989，21(2)：175～176)；生理活性研究表明有抗脂肪分解及降低血糖和肝糖作用(藥學學報.1990，25(6)：401～402；藥學學報.1990，25(10)：727～728)；對該肽的基因進行了化學合成和克隆(生物化學雜志.1990，6(3)：193～195)。1991年又報道從紅參中經DEAE-Cellulose，Sephadex?G-10和RP-HPLC純化得到兩個肽(藥學學報.1991，26(7)：499～502)，其一為13肽：3Gly，2Ser，2Glu，Ala，2Asp，Thr，Leu，Val；另一為15肽：4Gly，3Ser，2Glu，2Ala，Asp，Thr，Leu，lle。測出了15肽的N末端為Asp，各肽均未給出一級結構。