[發明專利]一種抗疲勞人參酸性多糖的提取方法

有效

• 申請號: 200810051524.8
• 申請日: 2008-12-04
• 公開（公告）號: CN101747446A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發明（設計）人: 周義發;臺桂花;王佳;張緒;于麗;李珊珊;劉海波;孫成新
• 申請（專利權）人: 東北師范大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61K36/258;A61P43/00
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所屬領域

本發明涉及一種以人參根為原料，經提取、去雜質、精制，制備具有抗疲勞功效的人參酸性多糖的提取方法。

背景技術

人參是自古以來一直是入們首選的名貴的滋補藥物。具有大補元氣，生津，安神等功效。

隨著社會的日益發展，人們的生活節奏加快，生活壓力日益的增加，很多人處于亞健康狀態，飲食沒有規律，睡眠質量下降，經常出觀疲勞狀況。

疲勞是機體生理過程不能將其機能持續在一特定水平或各器官不能維持其預定的運動強度。疲勞容易導致細胞死亡或壞損，而細胞又是人體各個器官的最小單位，因此疲勞容易導致器官機能、功能衰退或直接對器官損壞造成器質性疾病。因機體疲勞而使得新陳代謝降低，無法及時排除的有害物質最容易損傷細胞，使細胞衰老、死亡。

發明內容

本發明的目的在于提供一種從人參根中提取精制具有抗疲勞活性的人參酸性多糖的方法，并且提出其抗疲勞活性的新功效。

本發明可以通過以下步驟實現：

1.人參總多糖的提取：100℃條件下用蒸餾水煮提人參根4小時。提取物經4層紗布過濾。過濾得到的殘渣在相同條件下重復提取兩次。合并三次提取所得濾液，離心去除其中的不溶物，上清液加入6倍體積的95％乙醇沉淀過夜，離心，收集沉淀，常規干燥后得到人參總多糖。

2.Sevag法脫蛋白：向10％的人參總多糖水溶液中加入1/4體積的Sevag試劑，充分震蕩兩個小時，離心去除蛋白層和氯仿層，水層重復操作至不再出現蛋白層為止，所得水溶液經乙醇沉淀和常規干燥得到脫蛋白人參多糖級分?WGP。

3.人參酸性糖的分離：將10％的脫蛋白人參多糖級分WGP經DEAE-纖維素離子交換柱Cl-型分級，用兩倍柱體積的蒸餾水洗脫，去除未結合的中性糖級分，收集由兩倍柱體積的0.5M氯化鈉水溶液洗脫得到的酸性糖級分，經蒸餾水透析、冰凍干燥得到氯化鈉洗脫的結合級分WGPA。

本發明方法制得人參酸性多糖，其單糖單元比例為半乳糖∶葡萄糖∶阿拉伯糖∶鼠李糖∶半乳糖醛酸∶葡萄糖醛酸＝18.0∶18.5∶15.5∶2.5∶44.2∶1.3，分子量范圍2.8×10³～1.8×10⁵。人參酸性多糖制成口服制劑、針劑、粘膜吸收、透皮吸收劑型使用。

人參多糖抗疲勞實驗

雄性ICR小鼠(18-22g)，被單獨放入玻璃圓柱體(直徑10厘米，高25厘米，水深10厘米，水溫23-25℃)中，時間持續6分鐘，分別記錄其游泳時間和固定不動時間，當小鼠以豎直位置漂在水面，且僅做微小的動作以保持其頭部伸出水面，我們將其定義為固定不動，固定時間從游泳的后四分鐘開始記錄，在第一次強迫游泳結束后，根據其固定不動時間，我們將小鼠分為三組，對照組，酸性多糖(40毫克/千克)組，中性多糖(160毫克/千克)組，每組8只，連續給藥15天，第15天，進行第二次強迫游泳實驗，其固定不動時間被記錄，給藥十五天后，心臟取血，4℃?3000轉/10分鐘分離血清，測其血清中的葡萄糖，乳酸脫氫酶，尿素氮及總蛋白的含量。其強迫游泳實驗的實驗結果(見表1)，血清生化參數(見表2)：

表1人參多糖抗疲勞強迫游泳實驗結果

與對照組相比，差別有顯著性意義：*p＜0.05

表2人參多糖抗疲勞血清生化實驗結果

與對照組相比，差別有顯著性意義：*p＜0.05

表1結果表明，與對照組(212.50±12.53)相比，酸性多糖(40mg/kg)能明顯增加小鼠游泳時間(203.40±19.76)，差別有顯著性意義(P＜0.05)，中性多糖并未增加小鼠游泳時間(218.30±19.16)說明酸性多糖具有抗疲勞的活性。

表2結果表明，酸性多糖(40mg/kg)能明顯增加小鼠乳酸脫氫酶的活性(1071.8±145.08)，差別有顯著性意義(P＜0.05)，中性多糖并未增加小鼠乳酸脫氫酶的活性(732.3±131.44)。通過對葡萄糖，尿素氮及總蛋白的測定，同樣表明酸性多糖(40mg/kg)具有更明顯的抗疲勞的活性。

附圖說明

圖1，WGP的DEAE-cellulose線性梯度洗脫圖。

圖2，WGPA的分子篩凝膠分布圖(sepharose?CL-6B)。

圖3，WGPA的單糖組成圖(HPLC)。

具體實施方式：