[發明專利]一種快速制備軟骨藻酸單克隆抗體的免疫方法

無效

• 申請號: 200810051131.7
• 申請日: 2008-08-29
• 公開（公告）號: CN101343322A
• 公開（公告）日: 2009-01-14
• 發明（設計）人: 周玉;張媛媛;沈慶豐;張磊;李春媛;支百惠;盧士英
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C07K16/14
• 分類號: C07K16/14;C07K1/14
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司
• 代理人: 趙正

1、一種快速制備軟骨藻酸單克隆抗體的免疫方法，其特征在于：采用如下步驟：

(1)取免疫動物為8周齡雄性BALB/C小鼠；

(2)第一天使用弗氏完全佐劑乳化完全抗原，抗原佐劑比6∶4，注射后肢足墊18-22μl/腳，共36-44μl/鼠，抗原量為36-44μg/鼠；

(3)第三或四天待應激狀態降低，使用弗氏不完全佐劑乳化，抗原佐劑比6∶4，注射后肢足墊27-33μl/腳，共54-66μl/鼠。抗原量為54-66μg/鼠；

(4)第14-16天檢測血清效價，效價達到1∶3200以上，取兩后腿腘淋巴結進行細胞融合。

2、根據權利要求1所述的免疫方法，其特征在于：采用1ml注射器，4.5號針頭，在后足墊第二或三肉鋪處進針，平行腳掌移動到腳掌中央處注射，注射完畢后停4-6秒鐘，轉動針頭30度再出針。

3、根據權利要求1所述的免疫方法，其特征在于：取8周齡雄性BALB/C小鼠，第一天使用弗氏完全佐劑乳化完全抗原，抗原佐劑比6∶4，注射后肢足墊20μl/腳，共40μl/鼠，抗原量為40μg/鼠；第三天待應激狀態降低，使用弗氏不完全佐劑乳化完全抗原，抗原佐劑比6∶4，注射后肢足墊30μl/腳，共60μl/鼠?？乖繛?0μg/鼠；第15天檢測血清效價，效價達到1∶3200以上，取兩后腿胭淋巴結進行細胞融合。

4、根據權利要求1或3所述的免疫方法，其特征在于：胭淋巴細胞的獲取是將被免疫小鼠摘取眼球獲取血清于-20℃保存作為陽性對照，將鼠浸在75％酒精2min消毒，無菌條件下將小鼠后退基部剪開一小口，用鈍頭剪刀向兩側撐，使皮與肌肉分離，摘除胭淋巴結，平皿中加入5mL的1640培養液，胭淋巴結入其中，用注射器芯和銅網研磨胭淋巴結，以獲得胭淋巴細胞。吹打均勻后，將細胞懸液依到試管中，并用1640培養液洗滌一次平皿。1000rpm離心10min，洗靜胭淋巴細胞，共3次，用5mL1640培養液懸浮細胞，計數細胞，使細胞濃度為5×10⁷個/mL，體積2mL以上。